本發(fā)明屬于中醫(yī)藥，具體涉及枸杞葉總生物堿在制備乙酰膽堿酯酶抑制劑中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
1、乙酰膽堿酯酶（acetylcholinesterase,?ache）是膽堿能系統(tǒng)中的關(guān)鍵水解酶，廣泛分布于中樞神經(jīng)系統(tǒng)、神經(jīng)肌肉接頭及非神經(jīng)組織（如紅細(xì)胞、視網(wǎng)膜等），其通過催化神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿（ach）分解為膽堿和乙酸，終止ach對(duì)突觸后膜的信號(hào)傳遞作用。ache的功能異常與多種疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)：在阿爾茨海默?。╝lzheimer's?disease,?ad）中，ache活性異常升高導(dǎo)致中樞膽堿能神經(jīng)元退化，突觸間隙ach水平顯著下降，引發(fā)認(rèn)知功能障礙和記憶衰退；在重癥肌無力（myasthenia?gravis,?mg）中，神經(jīng)肌肉接頭處的ach被過度分解，削弱肌肉收縮信號(hào)傳導(dǎo)，加劇肌無力癥狀；在青光眼（glaucoma）中，ache可能通過調(diào)控膽堿能通路影響眼壓及視網(wǎng)膜血流，加速視神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡。因此，抑制ache活性以恢復(fù)膽堿能系統(tǒng)功能，成為改善上述疾病的重要治療靶點(diǎn)。
2、目前臨床應(yīng)用的ache抑制劑主要為化學(xué)合成藥物，雖能快速抑制ache活性并緩解癥狀，但其長(zhǎng)期應(yīng)用存在顯著局限性：一是選擇性不足，例如多奈哌齊對(duì)中樞ache的高效抑制雖可改善ad患者認(rèn)知功能，但對(duì)周圍組織ache的抑制易引發(fā)惡心、腹瀉、心律失常等副作用；二是生物利用度低、易產(chǎn)生耐藥性，且無法通過多靶點(diǎn)機(jī)制干預(yù)疾病進(jìn)程（如ad的β淀粉樣蛋白沉積）。
3、近年來，天然提取物及其有效部位（如多糖、總生物堿、總黃酮等）因其多組分協(xié)同作用、低毒性及來源可持續(xù)性，成為新型ache抑制劑的研究熱點(diǎn)。枸杞葉作為傳統(tǒng)藥食兩用資源，富含生物堿、黃酮類、多糖及多酚等活性成分。研究表明，枸杞葉生物堿具有抗氧化、抗炎、免疫調(diào)節(jié)及神經(jīng)保護(hù)等多種藥理活性，但其對(duì)膽堿能系統(tǒng)的調(diào)控作用長(zhǎng)期未被重視。尤為關(guān)鍵的是，枸杞葉總生物堿作為一類多組分生物堿復(fù)合物，可能通過多靶點(diǎn)協(xié)同作用干預(yù)ache活性及疾病相關(guān)通路，但其具體抑制效果尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。
4、本發(fā)明首次揭示枸杞葉總生物堿對(duì)ache的高效抑制作用。相較于化學(xué)合成抑制劑，枸杞葉總生物堿來源廣泛、提取工藝簡(jiǎn)單。相較課題組前期授權(quán)發(fā)明專利（一種枸杞葉生物堿提取物的制備方法及應(yīng)用，申請(qǐng)?zhí)?02210611065.4，該方法在將枸杞葉提取物進(jìn)行陽離子樹脂純化之前，先采用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，步驟繁瑣且可能引入有毒試劑殘留），進(jìn)一步簡(jiǎn)化了枸杞葉總生物堿的制備方法，避免使用乙酸乙酯等有機(jī)溶劑，安全性更高。本發(fā)明的提出不僅為開發(fā)新型ache抑制劑提供了創(chuàng)新性候選成分，也為利用傳統(tǒng)藥用資源治療神經(jīng)退行性疾病、神經(jīng)肌肉疾病及眼科疾病開辟了全新策略，具有顯著的臨床應(yīng)用價(jià)值與社會(huì)經(jīng)濟(jì)效益。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本發(fā)明通過前期體外酶活性抑制實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)枸杞葉總生物堿能夠顯著抑制乙酰膽堿酯酶的活性。
2、因此，本發(fā)明的目的是提供枸杞葉總生物堿在制備乙酰膽堿酯酶抑制中的應(yīng)用。
3、本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供枸杞葉總生物堿的制備方法。
4、本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供枸杞葉總生物堿在制備治療乙酰膽堿酯酶異常升高相關(guān)疾病的藥物中的用途。
5、為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案：
6、枸杞葉總生物堿在制備乙酰膽堿酯酶抑制劑中的應(yīng)用，所述枸杞葉是來源于野生枸杞與茄科solanaceae枸杞屬 lycium?l.寧夏枸杞 lycium?barbarum?l.種間雜交選育的枸杞新品種、后又通過人工馴化和培育成為不開花、不結(jié)果的無果枸杞的芽葉。
7、進(jìn)一步的，所述枸杞葉總生物堿通過以下方法制備：以干燥枸杞葉為原料，加入乙醇水溶液提取，濾過后合并濾液，濃縮至適宜濃度后，采用陽離子交換樹脂純化，先以無水乙醇洗滌除去雜質(zhì)，繼續(xù)采用適宜濃度的nacl-乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液并濃縮，再采用大孔吸附樹脂或納濾膜除鹽，除鹽后溶液濃縮蒸干即得枸杞葉總生物堿。其中，乙醇水溶液中乙醇的體積濃度為0～100％，優(yōu)選60%乙醇水溶液；干燥枸杞葉與所述乙醇水溶液的比例為質(zhì)量(g)：體積(ml)＝1：5～50，優(yōu)選1：20；提取方法為加熱回流提取或超聲提取，回流提??；提取次數(shù)為1～3次，提取時(shí)間為0.5～3?h；nacl-乙醇水溶液的濃度為2%~8%nacl-55%~80%乙醇水溶液，優(yōu)選8％nacl-55％乙醇水溶液。
8、上述枸杞葉總生物堿在制備治療乙酰膽堿酯酶異常升高相關(guān)疾病的藥物中的用途。
9、所述乙酰膽堿酯酶異常升高相關(guān)疾病為阿爾茨海默病、重癥肌無力或青光眼。
10、本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：
11、本發(fā)明采用體外酶活性測(cè)試實(shí)驗(yàn)，首次發(fā)現(xiàn)枸杞葉總生物堿具有乙酰膽堿酯酶抑制活性，可用于乙酰膽堿酯酶異常升高疾病的治療，提供了枸杞葉總生物堿的新用途。
1.枸杞葉總生物堿在制備乙酰膽堿酯酶抑制劑中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述枸杞葉是來源于野生枸杞與茄科solanaceae枸杞屬lycium?l.寧夏枸杞lycium?barbarum?l.種間雜交選育的枸杞新品種、后又通過人工馴化和培育成為不開花、不結(jié)果的無果枸杞的芽葉。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，枸杞葉總生物堿通過以下方法制備：以干燥枸杞葉為原料，加入乙醇水溶液提取，濾過后合并濾液，濃縮至適宜濃度后，采用陽離子交換樹脂純化，先以無水乙醇洗滌除去雜質(zhì)，繼續(xù)采用適宜濃度的nacl-乙醇水溶液洗脫，收集洗脫液并濃縮，再采用大孔吸附樹脂或納濾膜除鹽，除鹽后溶液濃縮蒸干即得枸杞葉總生物堿。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的枸杞葉總生物堿的制備方法，其特征在于，所述乙醇水溶液中乙醇的體積濃度為0～100％，優(yōu)選60%乙醇水溶液；所述干燥枸杞葉與所述乙醇水溶液的比例為質(zhì)量(g)：體積(ml)＝1：5～50，優(yōu)選1：20；所述提取方法為加熱回流提取或超聲提取，優(yōu)選回流提取；提取次數(shù)為1～3次，提取時(shí)間為0.5～3?h；所述nacl-乙醇水溶液的濃度為2%~8%nacl-55%~80%乙醇水溶液，優(yōu)選8％nacl-55％乙醇水溶液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，具有乙酰膽堿酯酶抑制作用的枸杞葉總生物堿在制備治療乙酰膽堿酯酶異常升高相關(guān)疾病的藥物中的用途。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，其特征在于，所述乙酰膽堿酯酶異常升高相關(guān)疾病為阿爾茨海默病、重癥肌無力或青光眼。