本發(fā)明涉及醫(yī)用生物傷口敷料制備領(lǐng)域。更具體地，涉及一種具有雙緩釋作用的水凝膠敷料及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、皮膚作為人體最大、最脆弱的組織，承擔(dān)著多種重要的生理功能。皮膚與外界直接接觸，是保護(hù)人體免疫系統(tǒng)的第一道防線。每年，許多人因?yàn)椴煌脑蛟斐善つw受損。皮膚的完整性或者功能遭到破壞時會嚴(yán)重威脅患者的身體健康，嚴(yán)重時甚至造成經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。慢性傷口非正常愈合過程中，可能導(dǎo)致氧化應(yīng)激的產(chǎn)生。機(jī)體固有的氧化應(yīng)激主導(dǎo)著患者的主要病理改變，嚴(yán)重時甚至可能導(dǎo)致器官衰竭或死亡。

2、氧化應(yīng)激的產(chǎn)生與機(jī)體中過度產(chǎn)生的活性氧(ros)有關(guān)，它們會對組織中dna、脂類、蛋白質(zhì)、碳水化合物等進(jìn)行攻擊，造成細(xì)胞損傷，惡化循環(huán)反饋的信號通路，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)的加重，進(jìn)而導(dǎo)致傷口愈合緩慢。因此，在皮膚受傷后為傷口提供外源性綠原酸可以顯著減少組織水腫和血管通透性，降低組織脂質(zhì)過氧化和創(chuàng)面壞死。

3、慢性傷口愈合過程復(fù)雜，因此需要多功能創(chuàng)面敷料加速傷口愈合，避免進(jìn)一步損傷。設(shè)計出合適的傷口敷料一直是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中迫切關(guān)注的問題之一?？紤]到慢性傷口愈合過程中存在的問題及相關(guān)傷口敷料的研究，水凝膠因其微觀結(jié)構(gòu)和生物特性與生物軟組織相似等優(yōu)良的特性已被證明可以為慢性傷口愈合過程提供十分有利的條件，并被廣泛應(yīng)用于組織工程中。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、為解決上述問題，本發(fā)明的第一個目的在于提供一種具有雙緩釋作用的水凝膠敷料的制備方法。通過對綠原酸的雙緩釋設(shè)計，從而可以實(shí)現(xiàn)綠原酸的長效釋放，解決了綠原酸治療初期和治療后期差異大、穩(wěn)定性差等問題。

2、本發(fā)明的第二個目的在于提供一種具有雙緩釋作用的水凝膠敷料。

3、本發(fā)明的第三個目的在于提供一種利用如上所述的水凝膠敷料在制備緩釋傷口敷料中的應(yīng)用。

4、為達(dá)到上述第一個目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案：

5、本發(fā)明公開一種具有雙緩釋作用的水凝膠敷料的制備方法，包括如下步驟：

6、步驟1、將透明質(zhì)酸(ha)溶于水中，向其中依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺(edc)、n-羥基琥珀酰亞胺(nhs)以及n-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺鹽酸鹽，得到混合溶液a，調(diào)節(jié)其ph至5-6.8，反應(yīng)6-24h；

7、步驟2、加入與步驟1相同添加量的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺、n-羥基琥珀酰亞胺以及n-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺鹽酸鹽，繼續(xù)反應(yīng)6-24h，經(jīng)透析、干燥得到丙烯酸甲酯改性的透明質(zhì)酸(hama)；

8、步驟3、將綠原酸(cga)溶于水中，加入羧甲基殼聚糖(cmcs)溶液，調(diào)節(jié)ph至4.5-6.8后，再加入三聚磷酸鈉(tpp)溶液，得到混合溶液b，經(jīng)反應(yīng)、離心獲得負(fù)載綠原酸的羧甲基殼聚糖納米顆粒(cga/cmcs)；

9、步驟4、將丙烯酸甲酯改性的透明質(zhì)酸溶解在緩沖溶液中，加入負(fù)載綠原酸的羧甲基殼聚糖納米顆粒，混合均勻后，加入光引發(fā)劑，采用光交聯(lián)方式得到包埋納米顆粒的水凝膠敷料。

10、綠原酸是一種具有抗氧化、抗炎等良好的生物活性藥物，單獨(dú)使用時細(xì)胞毒性大，可以在較低用量下實(shí)現(xiàn)較好的殺菌效果，但正是因?yàn)榫G原酸細(xì)胞毒性大，所以安全用量偏低，如果一次用量超過安全用量后，會一定程度上影響正常細(xì)胞的存活，并且對于長期使用的應(yīng)用場景下，目前還沒有公開比較有效的綠原酸產(chǎn)品?；诖耍景l(fā)明提供了一種具有雙緩釋作用的水凝膠敷料，通過將綠原酸負(fù)載在羧甲基殼聚糖納米顆粒上以及將羧甲基殼聚糖納米顆粒包埋在制備的水凝膠體系中，實(shí)現(xiàn)對綠原酸雙緩釋的設(shè)計，即在患處作用時，綠原酸持續(xù)從羧甲基殼聚糖納米顆粒上釋放出來，進(jìn)入到水凝膠體系內(nèi)，完成一次緩釋，然后在水凝膠緩釋功能下，綠原酸又持續(xù)從水凝膠中釋放出來，進(jìn)入到患處治療，完成二次釋放。

11、進(jìn)一步，所述透明質(zhì)酸的分子量為1×105-2.5×106。

12、步驟1和步驟2中，1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺和n-羥基琥珀酰亞胺是為了活化羧基，便于透明質(zhì)酸與n-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺鹽酸鹽發(fā)生反應(yīng)，而選用n-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺鹽酸鹽對透明質(zhì)酸進(jìn)行改性，是為了將可光交聯(lián)的基團(tuán)接枝到透明質(zhì)酸上。在一個具體實(shí)施方式中，所述透明質(zhì)酸與每一次n-(3-氨基丙基)甲基丙烯酰胺鹽酸鹽添加量的質(zhì)量比為1-10:1-30；優(yōu)選為1-10:1-10；更優(yōu)選為1:1；透明質(zhì)酸與每一次1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺添加量的質(zhì)量比為1:1-1:8；所述1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺和n-羥基琥珀酰亞胺的摩爾比為1:2。

13、進(jìn)一步，所述綠原酸和羧甲基殼聚糖的質(zhì)量比為1-7:1-10；示例性地，所述綠原酸和羧甲基殼聚糖的質(zhì)量比可以為1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、2:3、2:5、3:4、3:5等等。為了保證可以制備得到羧甲基殼聚糖納米顆粒，所述羧甲基殼聚糖和三聚磷酸鈉的質(zhì)量比宜控制為6-12:0.75-2。

14、進(jìn)一步，混合溶液a中，所述透明質(zhì)酸的質(zhì)量濃度為0.1-1％；

15、混合溶液b中，所述綠原酸的質(zhì)量濃度為0.5-12％。

16、進(jìn)一步，所述丙烯酸甲酯改性的透明質(zhì)酸和負(fù)載綠原酸的羧甲基殼聚糖納米顆粒的質(zhì)量比為1-5:0.5-10。

17、進(jìn)一步，步驟4的緩沖溶液中，所述丙烯酸甲酯改性的透明質(zhì)酸的質(zhì)量濃度為0.5-5％。

18、進(jìn)一步，所述光引發(fā)劑選自i2959和/或苯基-2,4,6-三甲基苯甲?；鶃喠姿徜?lap)；

19、所述光引發(fā)劑的加入量為緩沖溶液質(zhì)量的0.4-2％。

20、為達(dá)到上述第二個目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案：

21、本發(fā)明公開一種具有雙緩釋作用的水凝膠敷料，采用如上所述的制備方法制備得到，所述水凝膠敷料為包埋cga/cmcs納米顆粒的hama水凝膠。

22、為達(dá)到上述第三個目的，本發(fā)明采用下述技術(shù)方案：

23、本發(fā)明公開一種制備如上所述的水凝膠敷料在制備緩釋傷口敷料中的應(yīng)用。

24、本發(fā)明的有益效果如下：

25、(1)與醫(yī)用紗布等傳統(tǒng)傷口敷料相比，本發(fā)明提供的水凝膠敷料從原料上來說克服傳統(tǒng)敷料單一功能的缺點(diǎn)，其主要成分透明質(zhì)酸因其獨(dú)特的分子結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)在機(jī)體內(nèi)表現(xiàn)出維持創(chuàng)口濕潤，促進(jìn)傷口愈合等多種重要的生理功能。另一成分綠原酸是金銀花的主要抗氧化、抗病毒有效藥理成分之一，可有效應(yīng)對慢性傷口處氧化應(yīng)激，進(jìn)而降低傷口愈合過程中的過度炎癥反應(yīng)。

26、(2)本發(fā)明提供的水凝膠敷料從結(jié)構(gòu)上說，離子交聯(lián)法制備的納米顆粒性質(zhì)穩(wěn)定，可持續(xù)釋放內(nèi)容物。通過紫外交聯(lián)形成由丙烯酸甲酯改性的透明質(zhì)酸包埋有cga/cmcs納米顆粒的水凝膠，可適用于不規(guī)則傷口。該水凝膠不僅具有良好的機(jī)械性能、細(xì)胞相容性，與傳統(tǒng)的水凝膠相比還能實(shí)現(xiàn)對藥物的有效控釋，提高藥物的利用度并持續(xù)發(fā)揮抗氧化作用，很好地滿足慢性傷口愈合的需求。

27、(3)本發(fā)明提供具有持續(xù)抗氧化和抗菌活性的水凝膠敷料制備方法過程簡便，生產(chǎn)成本低，易大規(guī)模生產(chǎn)。