本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種用于遞送核酸的脂質(zhì)納米顆粒及其制備方法和用途。
背景技術(shù)：
1、核酸藥物主要指具有遺傳特性和藥理活性的含核苷酸或脫氧核苷酸結(jié)構(gòu)的化合物，可用于腫瘤、組織再生、創(chuàng)面愈合、肺纖維化、炎性疾病、微生物感染等治療，核酸藥物在注射進(jìn)入人體后，需要高效安全的藥物遞送系統(tǒng)將其遞送到病變部位，該藥物遞送系統(tǒng)需要存留足夠時(shí)間以準(zhǔn)確靶向到病變部位，同時(shí)避免損傷正常細(xì)胞。
2、目前的遞送系統(tǒng)可分為病毒載體和非病毒載體。病毒載體由于其免疫原性、致瘤性、和有限的載藥量，使其在核酸藥物中的應(yīng)用較少；非病毒載體，如聚合物類(lèi)(polymer)、脂質(zhì)類(lèi)(liposome或lnp)，其可以將核酸藥物與特定的配體結(jié)合使其能夠靶向特定的細(xì)胞，在目前的核酸藥物中應(yīng)用較多。lnp是目前核酸藥物研究應(yīng)用多的遞送系統(tǒng)之一，lnp遞送系統(tǒng)能夠安全而有效地遞送核酸。具有核酸包封率高，能夠有效轉(zhuǎn)染細(xì)胞，組織穿透性強(qiáng)，細(xì)胞毒性和免疫原性低等有利于遞送藥物等優(yōu)勢(shì)，與其他遞送系統(tǒng)相比，具有巨大的優(yōu)勢(shì)，因此，lnp遞送系統(tǒng)具有廣闊的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用前景。
3、現(xiàn)有技術(shù)中，lnp遞送系統(tǒng)往往是由可電離脂質(zhì)(陽(yáng)離子脂質(zhì))、類(lèi)固醇、中性脂質(zhì)，peg-脂質(zhì)、核酸藥物等成分構(gòu)成。例如：專(zhuān)利文獻(xiàn)au2020325221a1公開(kāi)了一種靶細(xì)胞傳遞lnps的組合物，包括(i)可電離脂質(zhì)；(ii)甾醇或其他結(jié)構(gòu)脂質(zhì)；(iii)非陽(yáng)離子輔助脂質(zhì)或磷脂；(iv)peg脂質(zhì)和(v)封裝在lnp中和/或關(guān)聯(lián)的藥劑(例如核酸分子)，這四組分以特定的配比增強(qiáng)靶細(xì)胞的遞送效率。專(zhuān)利文獻(xiàn)wo2021/250263a1公開(kāi)了一種包括可電離脂質(zhì)、磷脂、甾醇、peg脂質(zhì)和一種或多種核酸，公開(kāi)了包括小于約1mol％的c14-peg2000脂質(zhì)，以及其他脂質(zhì)的特定百分比。專(zhuān)利cn102712935b公開(kāi)了一種脂質(zhì)粒子，其包含：陽(yáng)離子脂質(zhì)；中性脂質(zhì)、兩性離子脂質(zhì)或陰離子脂質(zhì)；peg-脂質(zhì)；甾醇及核酸，并將上述組分組裝成具有實(shí)體核心的有實(shí)體核心的脂質(zhì)粒子，其實(shí)體核心能達(dá)到更高的包覆效率。專(zhuān)利文獻(xiàn)wo?2021/055849a1公開(kāi)了一種結(jié)構(gòu)如下的脂質(zhì)：該結(jié)構(gòu)能夠提高其安全性、有效性和特異性。專(zhuān)利文獻(xiàn)wo2021/026358al公開(kāi)了一種靶細(xì)胞傳遞脂質(zhì)納米顆粒(lnp)：包括(i)可電離的脂質(zhì)(ii)甾醇或其他結(jié)構(gòu)脂質(zhì)；(iii)非陽(yáng)離子輔助脂質(zhì)或磷脂；(iv)有效載荷；(v)聚乙二醇脂質(zhì)，作為一種藥物遞送系統(tǒng)，兼顧安全性和有效性。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)將可電離脂質(zhì)化合物中引入膽固醇同樣也可以用來(lái)遞送核酸藥物。專(zhuān)利文獻(xiàn)us7514099b2公開(kāi)了一種膽固醇的氨基脂質(zhì)化合物clindma該化合物可以與磷脂、膽固醇、peg脂質(zhì)組成四組分lnp或者與磷脂、dmoba脂質(zhì)、膽固醇和peg脂質(zhì)組成五組分lnp來(lái)遞送sirna。專(zhuān)利cn112424214a公開(kāi)了一種由膽固醇和直鏈烯烴形成的可電離陽(yáng)離子脂質(zhì)化合物(3)該化合物與膽固醇、dppc、dope和dmg-peg200構(gòu)建lnp來(lái)遞送核酸，需要5種脂質(zhì)輔料，構(gòu)建過(guò)程較為復(fù)雜，且其pdi為-0.292，多分散系數(shù)較差。現(xiàn)有技術(shù)存在對(duì)lnp中的各組分進(jìn)行結(jié)構(gòu)優(yōu)化，特別是對(duì)可電離陽(yáng)離子脂質(zhì)進(jìn)行結(jié)構(gòu)優(yōu)化，以進(jìn)一步獲得安全、有效、穩(wěn)定，且構(gòu)建簡(jiǎn)單、能夠同時(shí)適用不同的給藥途徑的lnp遞送系統(tǒng)的迫切需求。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、一方面，本發(fā)明提供一種脂質(zhì)納米顆粒組合物，其包含類(lèi)固醇-陽(yáng)離子脂質(zhì)化合物、中性磷脂和聚乙二醇脂質(zhì)三種脂質(zhì)成分。
2、另一方面，本發(fā)明提供一種核酸藥物遞送系統(tǒng)，其包含一種脂質(zhì)納米顆粒組合物，該組合物包含類(lèi)固醇-陽(yáng)離子脂質(zhì)化合物、中性磷脂和聚乙二醇脂質(zhì)三種脂質(zhì)成分。
3、另一方面，本發(fā)明提供一種脂質(zhì)納米顆粒組合物在制備核酸藥物遞送系統(tǒng)中的用途。
4、另一方面，本發(fā)明提供一種脂質(zhì)納米顆粒組合物在制備冷凍干燥劑中的用途。
5、本發(fā)明的有益效果：
6、本發(fā)明利用類(lèi)固醇-陽(yáng)離子脂質(zhì)化合物制備的組合物具有較佳的穩(wěn)定性和轉(zhuǎn)染效率。利用將脂質(zhì)納米顆粒用于遞送核酸，例如mrna，可以高效穩(wěn)定的將核酸藥物遞送至靶細(xì)胞或器官，在動(dòng)物體內(nèi)可引起較高的特異性抗體應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答，本發(fā)明提供的脂質(zhì)納米顆粒經(jīng)肌肉注射給藥后在原位表達(dá)而不進(jìn)入肝臟，可以降低系統(tǒng)暴露，從而具有更好的安全性。
1.一種用于核酸藥物遞送的脂質(zhì)納米顆粒組合物，其特征在于，包含：類(lèi)固醇-陽(yáng)離子脂質(zhì)化合物、中性磷脂、聚乙二醇脂質(zhì)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于核酸藥物遞送的脂質(zhì)納米顆粒組合物，其特征在于，所述類(lèi)固醇-陽(yáng)離子脂質(zhì)：中性磷脂：聚乙二醇脂質(zhì)摩爾比為30-90：10-60：0.5-20。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于核酸藥物遞送的脂質(zhì)納米顆粒組合物，其特征在于，所述類(lèi)固醇-陽(yáng)離子脂質(zhì)：中性磷脂：聚乙二醇脂質(zhì)摩爾比為30-80：20-80：0.5-20。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于核酸藥物遞送的脂質(zhì)納米顆粒組合物，其特征在于，所述類(lèi)固醇-陽(yáng)離子脂質(zhì)：中性磷脂：聚乙二醇脂質(zhì)摩爾比為30-80：30-80：0.5-20。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的用于核酸藥物遞送的脂質(zhì)納米顆粒組合物，其特征在于，所述類(lèi)固醇-陽(yáng)離子脂質(zhì)選自：
6.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的用于核酸藥物遞送的脂質(zhì)納米顆粒組合物，其特征在于，所述類(lèi)固醇-陽(yáng)離子脂質(zhì)選自：
7.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的用于核酸藥物遞送的脂質(zhì)納米顆粒組合物，其特征在于，所述的聚乙二醇脂質(zhì)選自：peg-dag、peg-dmg、peg-daa、peg-磷脂、peg-神經(jīng)酰胺(cer)、peg-pe、pegs-dag(例如peg-s-dmg)、peg二烷氧基丙基氨基甲酰胺、peg-二月桂酰氧基丙基、peg-二肉豆蔻酰氧基丙基、peg-二棕櫚酰氧基丙基、peg-二硬脂酰氧基丙基、dmg-peg、dsg-peg、peg-二月桂?；视汀eg-二棕櫚酰甘油、peg-二硬脂酰基甘油、peg-二月桂酰基甘油酰胺、peg-二肉豆蔻?；视王０?、peg-二棕櫚酰甘油酰胺、peg-二硬脂?；视王０贰eg-dmb、dspe-peg、dspe-peg-oh、2[(聚乙二醇)2000]n,n二十四烷基乙酰胺(alc0159)、peg-dspe、peg二棕櫚油基、peg二油基、peg二硬脂基、peg-dppe或peg?c?dma。
8.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的用于核酸藥物遞送的脂質(zhì)納米顆粒組合物，其特征在于，所述的中性磷脂選自：dspc、dopc、dppc、dopg、dppg、dope、popc、pope、dope-mal、dppe、dmpe、dspe、sope、hspc、epc、dops、sm、dmpc、dmpg、dspg、depc、popg、depe、dlpe、dphype。
9.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的用于核酸藥物遞送的脂質(zhì)納米顆粒組合物，其特征在于，所述組合物中還包含核酸藥物；優(yōu)選地，所述核酸藥物選自dna或rna；更優(yōu)選地，所述核酸藥物選自反義rna、sarna、mrna、lncrna、mirna、sirna、pirna、grna、tsrna、circrna或自復(fù)制mrna；最優(yōu)選地，所述核酸藥物為mrna。
10.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的用于核酸藥物遞送的脂質(zhì)納米顆粒組合物，其特征在于，所述脂質(zhì)納米顆粒組合物的氮磷比為(1～20)：1。
11.根據(jù)前述權(quán)利要求任一項(xiàng)所述的用于核酸藥物遞送的脂質(zhì)納米顆粒組合物，其特征在于，所述脂質(zhì)納米顆粒具有40nm～150nm的直徑。
12.根據(jù)權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)納米顆粒組合物在制備核酸藥物遞送系統(tǒng)中的用途。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的用途，其特征在于，所述遞送系統(tǒng)為疫苗。
14.根據(jù)權(quán)利要求13所述的用途，其特征在于，所述的疫苗用于預(yù)防癌癥、病毒感染、細(xì)菌感染或真菌感染的疫苗；優(yōu)選地，所述的病毒選自：諾如病毒、埃博拉病毒、冠狀病毒、巨細(xì)胞病毒、登革熱病毒、寨卡病毒、柯薩奇病毒、腸病毒、肝炎病毒、單純皰疹病毒、人乳頭瘤病毒、流感病毒、馬爾堡病毒、麻疹病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒、狂犬病病毒、輪狀病毒或麻疹病毒。
15.根據(jù)權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)所述的脂質(zhì)納米顆粒組合物在制備冷凍干燥劑中的用途。