本申請(qǐng)涉及生物，特別涉及一種固定化酶及其制備方法的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
1、酶固定化技術(shù)能夠改善生物催化劑的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性和操作穩(wěn)定性，使其易于從反應(yīng)體系中分離并重新投入使用，從而降低生物酶的使用成本，因此能夠有效拓展生物酶在制藥、食品、紡織等工業(yè)中的應(yīng)用。酶固定化的過(guò)程中，載體的性質(zhì)、酶的濃度和用量、修飾劑的種類(lèi)和添加方法等都會(huì)對(duì)生物酶在載體上的結(jié)構(gòu)和分布狀態(tài)有影響。
2、為了提高酶制劑的催化性能和貨架壽命，常用的策略是在固定化過(guò)程中或者液體酶中添加酶激活劑或者保護(hù)劑。激活劑或者保護(hù)劑的存在，一方面能夠?qū)⑸锩傅臉?gòu)型調(diào)整至最佳狀態(tài)，另一方面可以在載體孔道中對(duì)生物酶形成保護(hù)層，提高其對(duì)高溫、酸堿、溶劑等的耐受性。
3、傳統(tǒng)的采用酶激活劑或者保護(hù)劑等制備固定化酶的工藝，例如：cn200510112638.5中記載的用脂肪酶、載體和共固定劑制備固定化脂肪酶，其中，共固定劑為peg6000、椰子油、吐溫80、明膠、卵磷脂和硫酸鎂中的至少一種。然而，采用傳統(tǒng)的固定化酶的制備工藝，制備的固定化酶的性能有待提升。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、基于此，本申請(qǐng)的一個(gè)或者多個(gè)實(shí)施例提供一種固定化酶及其制備方法的應(yīng)用。
2、本申請(qǐng)的一個(gè)或者多個(gè)實(shí)施例提供一種固定化酶的制備方法，所述制備方法包括如下步驟：
3、混合酶液和吐溫80，制備混合乳液；以及，
4、采用吸附法，將所述混合乳液和載體制備成固定化酶；
5、其中，
6、在600nm±3nm的檢測(cè)波長(zhǎng)下，所述混合乳液的od值＝預(yù)設(shè)值±6，所述預(yù)設(shè)值＝(0.37r-1)×(c-0.4)，
7、r＝mt÷mp，mt為所述吐溫80的質(zhì)量值，mp為所述酶液中酶的質(zhì)量值，所述吐溫80的質(zhì)量的單位和所述酶液中酶的質(zhì)量的單位相同，
8、c為所述酶液中酶的質(zhì)量濃度值，所述酶液中酶的質(zhì)量濃度的單位用a/b表示，b＝a×103。
9、在本申請(qǐng)的一些實(shí)施方式中，所述酶液滿(mǎn)足如下條件中的一個(gè)或者多個(gè)：
10、(1)所述酶液中酶的質(zhì)量濃度不超過(guò)25mg/g；可選地，所述酶液中酶的質(zhì)量濃度為5mg/g-25mg/g；以及，
11、(2)所述酶液中酶的酶活力為5500u/mg-11000u/mg。
12、在本申請(qǐng)的一些實(shí)施方式中，所述r≤20；可選地，所述r為3-20；進(jìn)一步可選地，所述r為3-15。
13、在本申請(qǐng)的一些實(shí)施方式中，每100g所述酶液對(duì)應(yīng)的所述吐溫80的用量不超過(guò)25g；可選地，每100g所述酶液對(duì)應(yīng)的所述吐溫80的用量為3.75g-22.5g。
14、在本申請(qǐng)的一些實(shí)施方式中，所述制備方法滿(mǎn)足如下條件中的一個(gè)或者多個(gè)：
15、1)所述酶包括脂肪酶；可選地，所述脂肪酶的微生物來(lái)源包括疏棉狀嗜熱絲孢菌、米根霉、米黑根毛霉、米曲霉、畢赤酵母或者其基因改造菌種；
16、2)所述酶液的溶劑包括10mm-100mm、ph為5.5-6.5的磷酸鹽緩沖液；以及，
17、3)混合所述的酶液和吐溫80的方式包括振蕩或者攪拌；
18、可選地，振蕩的條件包括：溫度為4℃-30℃，轉(zhuǎn)速為120rpm-180rpm，時(shí)間為10min-2h；
19、可選地，攪拌的條件包括：頻率為25hz-35hz，時(shí)間為10min-2h。
20、在本申請(qǐng)的一些實(shí)施方式中，所述吸附法包括物理吸附法；可選地，所述載體包括大孔吸附樹(shù)脂；進(jìn)一步可選地，所述大孔吸附樹(shù)脂包括甲基丙烯酸樹(shù)脂大孔吸附樹(shù)脂或/和聚苯乙烯樹(shù)脂大孔吸附樹(shù)脂。
21、在本申請(qǐng)的一些實(shí)施方式中，所述吸附法包括離子吸附法；可選地，所述載體包括離子交換樹(shù)脂；進(jìn)一步可選地，所述離子交換樹(shù)脂包括甲基丙烯酸型陰離子交換樹(shù)脂。
22、在本申請(qǐng)的一些實(shí)施方式中，所述制備方法滿(mǎn)足如下條件中的一個(gè)或者多個(gè)：
23、(a)所述吸附法的條件包括：在振蕩或者攪拌條件下進(jìn)行至所述混合乳液和所述載體的混合物中1h內(nèi)所述酶的濃度變化＜0.1mg/g；可選地，振蕩的條件包括：轉(zhuǎn)速為120rpm-180rpm，時(shí)間為10min-2h；可選地，攪拌的條件包括：頻率為25hz-35hz，時(shí)間為10min-2h；
24、(b)所述吸附法的條件包括：吸附溫度為4℃-30℃；
25、(c)所述載體的質(zhì)量與所述酶液中的酶的質(zhì)量的比值為(25-50)：1；以及，
26、(d)所述固定化酶的含水量為2wt％-20wt％。
27、本申請(qǐng)的一個(gè)或者多個(gè)實(shí)施例提供還提供一種固定化酶，其通過(guò)所述的制備方法制備。
28、本申請(qǐng)的一個(gè)或者多個(gè)實(shí)施例還提供一種酶催化產(chǎn)物的生產(chǎn)方法，所述生產(chǎn)方法包括如下步驟：
29、采用所述的制備方法制備固定化酶；以及，
30、用所述固定化酶催化底物，制備酶催化產(chǎn)物。
31、相對(duì)于傳統(tǒng)技術(shù)，本申請(qǐng)實(shí)施例的有益效果包括：
32、本申請(qǐng)實(shí)施例提供的固定化酶的制備方法，能夠保證吐溫80跟酶蛋白的充分相互作用，改善吐溫80在載體上的有效摻雜，提高固定化酶的成品重量，且使產(chǎn)品的應(yīng)用性能穩(wěn)定優(yōu)異。并且，該方法以od值作為添加載體的依據(jù)，有利于工藝質(zhì)量的高效、準(zhǔn)確把控，為固定化酶工藝的質(zhì)量把控提供了普適性的依據(jù)。
1.一種固定化酶的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括如下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的固定化酶的制備方法，其特征在于，所述酶液滿(mǎn)足如下條件中的一個(gè)或者多個(gè)：
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的固定化酶的制備方法，其特征在于，所述r≤20；
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的固定化酶的制備方法，其特征在于，每100g所述酶液對(duì)應(yīng)的所述吐溫80的用量不超過(guò)25g；
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的固定化酶的制備方法，其特征在于，所述制備方法滿(mǎn)足如下條件中的一個(gè)或者多個(gè)：
6.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的固定化酶的制備方法，其特征在于，所述吸附法包括物理吸附法；
7.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的固定化酶的制備方法，其特征在于，所述吸附法包括離子吸附法；
8.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的固定化酶的制備方法，其特征在于，所述制備方法滿(mǎn)足如下條件中的一個(gè)或者多個(gè)：
9.一種固定化酶，其通過(guò)權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的制備方法制備。
10.一種酶催化產(chǎn)物的生產(chǎn)方法，其特征在于，所述生產(chǎn)方法包括如下步驟：