本發(fā)明涉及一種使抗體產(chǎn)生細胞永生化的方法以及通過該方法得到的永生化轉化細胞（永生化的轉化細胞）。本申請基于在2022年12月6日向日本申請的特愿2022-195145號要求優(yōu)先權，將該申請的內(nèi)容以引用的方式并入本文。
背景技術：
1、在細胞中存在具有增殖能力的細胞以及不增殖的細胞。即使是具有增殖能力的細胞，通?？煞至训拇螖?shù)在遺傳上也是有限的，具有有限的壽命。因此，例如，作為從動物的組織采集并培養(yǎng)的細胞的原代培養(yǎng)細胞，即使在適當?shù)臈l件下增殖，也只能分裂有限次數(shù)，其后會失去增殖能力。因此，對于具備有用的性狀的細胞，嘗試了解除可分裂次數(shù)的限制以獲得無限制地進行分裂的能力的所謂永生化。一般而言，細胞通過轉化來獲得永生化能力。
2、單克隆抗體作為一種用于利用免疫反應檢測目標物質(zhì)的試劑被廣泛應用。另外，在近年，作為抗體醫(yī)藥的有效成分，利用人類單克隆抗體，單克隆抗體具有工業(yè)利用價值。在大多情況下，通過抗體產(chǎn)生細胞產(chǎn)生單克隆抗體，為了穩(wěn)定地供給單克隆抗體，對抗體產(chǎn)生細胞要求不損害其抗體產(chǎn)生能力地永生化，以便能夠?qū)崿F(xiàn)產(chǎn)業(yè)規(guī)模的體外培養(yǎng)。
3、對于嚙齒類的單克隆抗體的產(chǎn)生，已經(jīng)確立了雜交瘤技術。雜交瘤是對動物進行免疫、分離出產(chǎn)生所需單克隆抗體的單一b細胞來進行原代培養(yǎng)、使b細胞與骨髓瘤細胞(myeloma：骨髓瘤)進行融合而樹立的方法，所產(chǎn)生的雜交瘤在保持其產(chǎn)生抗體能力的狀態(tài)下永生化。但是，除了嚙齒類之外沒有適當?shù)碾s交瘤技術，因此對于抗體產(chǎn)生細胞的永生化，需要利用復雜的基因工程手段來進行轉化。
4、作為使原代培養(yǎng)細胞永生化的方法，例如已知有將三種作為癌相關基因的bcl-2(b-cell/cll?lymphoma?2)基因、myc基因以及ccnd1基因?qū)雙rob細胞進行轉化從而永生化的方法(非專利文獻1)。另外已知有將兩種作為癌相關基因的c-myc基因以及sv40(simian?virus?40：猴病毒40)大t抗原基因（large?t?antigen?gene）導入人胎兒成纖維細胞進行轉化從而永生化的方法(非專利文獻2)。
5、現(xiàn)有技術文獻
6、非專利文獻
7、非專利文獻1：nakagawa,? et?al.,?haematologica,?2011,?vol.96(9),?p.1318-1326。
8、非專利文獻2：kim,? et?al.,?experimental?and?molecular?medicine,?2001,vol.33(4),?p.293-298。
技術實現(xiàn)思路
1、發(fā)明要解決的問題
2、作為終末分化細胞的抗體產(chǎn)生細胞，與prob細胞不同，即使在導入bcl-2基因、myc基因以及ccnd1基因進行了轉化的情況下，也無法獲得永生化能力。另外，在將c-myc基因以及sv40大t抗原基因?qū)肟贵w產(chǎn)生細胞進行了轉化的情況下，雖然能夠獲得增殖能力并永生化，但是無法保持其性狀、無法得到保持抗體生成能力的永生化細胞。
3、本發(fā)明的目的在于提供一種使抗體產(chǎn)生細胞永生化的方法以及通過該方法得到的永生化轉化細胞。
4、用于解決問題的手段
5、為了解決上述問題，本發(fā)明人經(jīng)過深入研究發(fā)現(xiàn)，通過向從用抗原進行免疫處理的哺乳動物采集的抗體產(chǎn)生細胞中導入sv40t抗原基因、myc家族基因、bcl-2家族基因以及cyclin?d?(細胞周期蛋白d)家族基因進行轉化，能夠在保持其產(chǎn)生抗體能力的狀態(tài)下得到永生化，從而完成了本發(fā)明。
6、即，本發(fā)明提供了諸如下述藥劑等技術方案。
7、[1]?一種永生化細胞的制造方法，其通過向非永生化的抗體產(chǎn)生細胞中導入sv40t抗原基因、bcl-2家族基因以及選自由myc家族基因和cyclin?d家族基因所構成的組中的一種以上的基因來制造永生化細胞。
8、[2]?如[1]所述的永生化細胞的制造方法，其中，所述myc家族基因是c-myc基因或l-myc基因。
9、[3]?如[1]或[2]所述的永生化細胞的制造方法，其中，所述bcl-2家族基因是bcl-2基因或bcl-xl基因。
10、[4]?如[1]至[3]中任一項所述的永生化細胞的制造方法，其中，所述cyclin?d家族基因是cyclin?d1基因或cyclin?d3基因。
11、[5]?如[1]至[3]中任一項所述的永生化細胞的制造方法，其中，向所述非永生化的抗體產(chǎn)生細胞中導入sv40t抗原基因、bcl-2家族基因、myc家族基因以及cyclin?d家族基因。
12、[6]?一種永生化抗體產(chǎn)生細胞的制造方法，其通過從哺乳動物采集抗體產(chǎn)生細胞進行原代培養(yǎng)并向所得到的原代抗體產(chǎn)生細胞中導入sv40t抗原基因、bcl-2家族基因以及選自由myc家族基因和cyclin?d家族基因所構成的組中的一種以上的基因來制造永生化抗體產(chǎn)生細胞。
13、[7]?如[6]所述的永生化抗體產(chǎn)生細胞的制造方法，其中，所述哺乳動物是經(jīng)抗原免疫處理的動物，從所述永生化抗體產(chǎn)生細胞中篩選產(chǎn)生識別所述抗原的抗體的永生化抗體產(chǎn)生細胞。
14、[8]?一種抗體的制造方法，其中，通過[6]或[7]所述的永生化抗體產(chǎn)生細胞的制造方法制造永生化抗體產(chǎn)生細胞，對所述永生化抗體產(chǎn)生細胞進行培養(yǎng)，回收所產(chǎn)生的抗體。
15、[9]?一種轉化細胞，其是通過向非永生化的抗體產(chǎn)生細胞中導入外源性sv40t抗原基因、外源性bcl-2家族基因以及選自由外源性myc家族基因及外源性cyclin?d家族基因所構成的組中的一種以上的基因而實現(xiàn)永生化的轉化細胞。
16、[10]?如[9]所述的轉化細胞，其具有產(chǎn)生抗體的能力。
17、發(fā)明效果
18、基于本發(fā)明的永生化細胞的制造方法，能夠比較簡便地使通過原代傳代培養(yǎng)等得到的抗體產(chǎn)生細胞永生化，能夠得到在保持其產(chǎn)生抗體能力的狀態(tài)下獲得永生化能力的轉化細胞。由此獲得的轉化細胞例如對于單克隆抗體的制造是有用的。
1.一種永生化細胞的制造方法，其通過向非永生化的抗體產(chǎn)生細胞中導入sv40t抗原基因、bcl-2家族基因以及選自由myc家族基因和cyclin?d家族基因所構成的組中的一種以上的基因來制造永生化細胞。
2.如權利要求1所述的永生化細胞的制造方法，其中，
3.如權利要求1所述的永生化細胞的制造方法，其中，
4.如權利要求1所述的永生化細胞的制造方法，其中，
5.如權利要求1所述的永生化細胞的制造方法，其中，
6.一種永生化抗體產(chǎn)生細胞的制造方法，其通過從哺乳動物采集抗體產(chǎn)生細胞進行原代培養(yǎng)并向所得到的原代抗體產(chǎn)生細胞中導入sv40t抗原基因、bcl-2家族基因以及選自由myc家族基因和cyclin?d家族基因所構成的組中的一種以上的基因來制造永生化抗體產(chǎn)生細胞。
7.如權利要求6所述的永生化抗體產(chǎn)生細胞的制造方法，其中，
8.一種抗體的制造方法，其中，通過權利要求6或7所述的永生化抗體產(chǎn)生細胞的制造方法制造永生化抗體產(chǎn)生細胞，對所述永生化抗體產(chǎn)生細胞進行培養(yǎng)，回收所產(chǎn)生的抗體。
9.一種轉化細胞，其通過向非永生化的抗體產(chǎn)生細胞中導入外源性sv40t抗原基因、外源性bcl-2家族基因以及選自由外源性myc家族基因和外源性cyclin?d家族基因所構成的組中的一種以上的基因而實現(xiàn)永生化。
10.如權利要求9所述的轉化細胞，其中，