本發(fā)明涉及藥物分析檢測，尤其涉及一種拉莫三嗪中基因毒性雜質(zhì)的檢測方法。
背景技術(shù)：
1、拉莫三嗪(英文名：lamotrigine)，具有三嗪骨架結(jié)構(gòu)，結(jié)構(gòu)式如下，化學(xué)名為3,5-二氨基-6-(2,3-二氯苯基)-1,2,4-三嗪，分子式為：c9h7cl2n5，分子量：256.09，是一種新型抗癲癇藥物。藥理學(xué)研究的結(jié)果顯示，拉莫三嗪是一種封閉電壓應(yīng)用-依從性的鈉離子高通道阻滯劑，與經(jīng)典抗癲癇藥相比，拉莫三嗪具有耐受性良好、酶誘導(dǎo)和酶抑制不明顯、妊娠期毒性較小等優(yōu)點。
2、
3、雜質(zhì)k為拉莫三嗪的氧化降解雜質(zhì)，其結(jié)構(gòu)為氮氧化物，結(jié)構(gòu)式如下，屬于潛在基因毒性雜質(zhì)，此類潛在基因毒性雜質(zhì)每日攝入量限度為1.5μg/天，根據(jù)拉莫三嗪每日最大服用量700mg計，在拉莫三嗪成品中雜質(zhì)k的限度指標(biāo)為2.14ppm，其含量遠低于常規(guī)有機雜質(zhì)0.05％或0.10％的指標(biāo)限度，需要使用靈敏度更好的檢測方法進行分析。因此，為了更好地監(jiān)控拉莫三嗪藥物的產(chǎn)品質(zhì)量，進一步保護患者的用藥安全，需要建立一種檢測拉莫三嗪藥物中潛在基因毒性雜質(zhì)k的方法。
4、
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、針對上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種拉莫三嗪中基因毒性雜質(zhì)的檢測方法。
2、為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供的技術(shù)方案是：
3、一種拉莫三嗪中基因毒性雜質(zhì)的檢測方法，所述基因毒性雜質(zhì)為雜質(zhì)k，采用高效液相色譜法進行檢測，色譜條件為：
4、檢測器：紫外檢測器；
5、色譜柱：venusil?xbp?c18(l)，150mm×4.6mm，5μm；
6、流動相a：濃度2.6g/l～2.8g/l的磷酸二氫鉀溶液和三乙胺的混合溶液，其中，所述流動相a的ph為6.95～7.05，磷酸二氫鉀溶液與乙腈的體積比為(148～152):1；流動相b：乙腈；
7、檢測波長：219nm～221nm；
8、洗脫方式為梯度洗脫，具體梯度洗脫順序為：
9、0～15min，100％流動相a；
10、15.1～20min，75％流動相a，25％流動相b；
11、21min～35min，100％流動相a。
12、相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提供的拉莫三嗪中基因毒性雜質(zhì)的檢測方法，采用venusil?xbp?c18(l)(150mm×4.6mm，5μm)色譜柱，以磷酸二氫鉀溶液-三乙胺的混合溶液和乙腈的混合溶液作為流動相，通過高效液相色譜法以梯度洗脫的方式，實現(xiàn)了拉莫三嗪中基因毒性雜質(zhì)(雜質(zhì)k)的準(zhǔn)確檢出，雜質(zhì)k的檢測限為0.0013μg/ml，定量限為0.0025μg/ml，符合ich?m7的指導(dǎo)原則的檢測要求。且本發(fā)明提供的方法專屬性強，靈敏度高，線性關(guān)系良好，同時，具有良好的精密度和耐用性，能夠?qū)崿F(xiàn)拉莫三嗪原料或其制劑中潛在基因毒性雜質(zhì)(雜質(zhì)k)的痕量檢測，可作為拉莫三嗪藥品質(zhì)量監(jiān)控的依據(jù)，有利于降低拉莫三嗪藥品的用藥安全風(fēng)險。
13、需要說明的是，本發(fā)明中主要檢測的基因毒性雜質(zhì)的化學(xué)名稱為3,5-二氨基-6-(2,3-二氯苯基)-1,2,4-三嗪-2-氧化物，結(jié)構(gòu)式如下所示，以下簡稱雜質(zhì)k。
14、
15、進一步地，采用磷酸調(diào)節(jié)流動相a的ph為6.95～7.05。
16、優(yōu)選的，所述流動相a的ph為7.0。
17、優(yōu)選的流動相a的ph值，可以減少譜帶拖尾，改善峰形，從而有利于提高原料和雜質(zhì)之間的分離度，使檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度及精密度更高。
18、優(yōu)選的，柱溫為34℃～36℃。
19、更優(yōu)選的，柱溫為35℃。
20、優(yōu)選的，流速為0.95ml/min～1.05ml/min。
21、更優(yōu)選的，流速為1.0ml/min。
22、優(yōu)選的，進樣體積為100μl。
23、優(yōu)選的檢測條件可使拉莫三嗪與雜質(zhì)k之間達到更高的分離度，以保證雜質(zhì)k的有效檢出，從而達到有效準(zhǔn)確控制拉莫三嗪中雜質(zhì)k含量的目的。
24、進一步地，所述供試品溶液的制備具體包括如下步驟：取拉莫三嗪樣品，加溶劑溶解并稀釋，得濃度為3mg/ml的供試品溶液。
25、具體地，所述溶劑為體積比30:70的甲醇和鹽酸溶液的混合溶液。
26、進一步地，所述鹽酸溶液的濃度為10.3g/l。
27、進一步地，所述對照品溶液的制備具體包括如下步驟：取雜質(zhì)k對照品，加甲醇溶解并稀釋，制成濃度0.1mg/ml的儲備液；然后用溶劑稀釋并制成濃度0.006μg/ml的對照溶液。
28、具體地，所述溶劑為體積比30:70的甲醇和鹽酸溶液的混合溶液。
29、進一步地，所述鹽酸溶液的濃度為10.3g/l。
30、本發(fā)明提供的檢測方法，能夠?qū)崿F(xiàn)拉莫三嗪與雜質(zhì)k的有效分離，準(zhǔn)確定性及定量檢測拉莫三嗪中痕量雜質(zhì)k，有利于對拉莫三嗪的質(zhì)量進行有效控制，且操作簡單快捷，靈敏度高，為拉莫三嗪產(chǎn)品的質(zhì)量控制提供了一種簡便可靠的方法，同時，也有利于提高含有拉莫三嗪的藥物制劑的質(zhì)量和安全性，具有較高的實用價值。
1.一種拉莫三嗪中基因毒性雜質(zhì)的檢測方法，其特征在于，所述基因毒性雜質(zhì)為雜質(zhì)k，采用高效液相色譜法進行檢測，色譜條件為：
2.如權(quán)利要求1所述的拉莫三嗪中基因毒性雜質(zhì)的檢測方法，其特征在于，采用磷酸調(diào)節(jié)流動相a的ph為6.95～7.05。
3.如權(quán)利要求2所述的拉莫三嗪中基因毒性雜質(zhì)的檢測方法，其特征在于，所述流動相a的ph為7.0。
4.如權(quán)利要求1所述的拉莫三嗪中基因毒性雜質(zhì)的檢測方法，其特征在于，柱溫為34℃～36℃。
5.如權(quán)利要求4所述的拉莫三嗪中基因毒性雜質(zhì)的檢測方法，其特征在于，柱溫為35℃。
6.如權(quán)利要求1所述的拉莫三嗪中基因毒性雜質(zhì)的檢測方法，其特征在于，流速為0.95ml/min～1.05ml/min。
7.如權(quán)利要求6所述的拉莫三嗪中基因毒性雜質(zhì)的檢測方法，其特征在于，流速為1.0ml/min。
8.如權(quán)利要求1所述的拉莫三嗪中基因毒性雜質(zhì)的檢測方法，其特征在于，進樣體積為100μl。
9.如權(quán)利要求1所述的拉莫三嗪中基因毒性雜質(zhì)的檢測方法，其特征在于，供試品溶液的濃度為3mg/ml。
10.如權(quán)利要求1所述的拉莫三嗪中基因毒性雜質(zhì)的檢測方法，其特征在于，所述對照溶液的濃度0.006μg/ml。