本發(fā)明屬于法醫(yī)病理學，尤其是涉及一種lonp1在制備機械性窒息死亡鑒定產(chǎn)品中的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、機械性窒息死亡(death?from?mechanical?asphyxia，dma)指是指機械性暴力作用引起呼吸障礙所導致的窒息死亡，可以由壓迫頸部(如縊死、勒死、扼死等)、閉塞呼吸道口、異物阻塞呼吸道內(nèi)部、液體吸入呼吸道、壓迫胸腹部或異常體位導致。在法醫(yī)學實踐中，由于缺乏特異性鑒定指標，dma的鑒定主要依靠尸體體表損傷痕跡、體表窒息征象(顏面部發(fā)紺、皮膚淤點性出血、玫瑰齒等)、內(nèi)部窒息征象(器官淤血、器官被膜下及粘膜瘀點性出血、肺氣腫等)并結(jié)合案情、現(xiàn)場及毒物分析結(jié)果，在排除其他死因后，最終做出“符合dma”的死因鑒定結(jié)論，尚不能做到精準死因鑒定(maj,jing?h,zeng?y,et?al.retrospectiveanalysis?of?319hanging?and?strangulation?cases?between?2001and?2014inshanghai[j].j?forensic?leg?med,2016,42:19-24.)。對于現(xiàn)場遭到破壞或尸體征象不明顯的疑似dma案件，往往連“符合dma”的鑒定結(jié)論都難以得出，嚴重影響了此類案件的早期刑事偵查及后續(xù)司法審判。

2、ferreira等人(ferreirap?g,munoz-aguirre?m,reverter?f,et?al.the?effectsof?death?and?post-mortem?cold?ischemia?on?human?tissue?transcriptomes[j].natcommun,2018,9(1):490.)的研究表明與缺氧、應(yīng)激、凋亡及腫瘤通路相關(guān)的某些基因會在死后發(fā)生特異性的表達水平差異。個體死亡后，細胞消耗內(nèi)環(huán)境中剩余的氧氣，經(jīng)歷氧含量逐漸降低的過程，而dma死者機體由于死前劇烈掙扎和/或呼吸受阻，短時間內(nèi)迅速消耗剩余氧氣，細胞經(jīng)歷的是與其他死因不同的“急性缺氧”過程。因此，dma機體在死后短時間內(nèi)某些rna和蛋白水平會發(fā)生與其他死因不同的變化。肺作為最大的呼吸器官，對缺氧的敏感度高，不同死因之間極有可能存在肺組織內(nèi)差異表達的rna和蛋白質(zhì)，這些生物大分子有望成為dma死因鑒定的潛在特異性生物標志物。

3、線粒體離子肽酶1(lon?peptidase?1,mitochondrial,lonp1)是一種位于線粒體中的atp依賴性絲氨酸蛋白酶，參與調(diào)節(jié)對氧化應(yīng)激、熱休克的反應(yīng)和代謝的調(diào)節(jié)(mah,chen?w,fan?w,et?al.roles?of?lonp1?in?oral-maxillofacial?developmental?defectsand?tumors:a?novel?insight[j].int?j?mol?sci,2022,23(21).)，并可通過以單鏈、位點特異性和鏈特異性的方式與線粒體啟動子和rna結(jié)合來調(diào)節(jié)線粒體基因的表達(ondrovicovag,liu?t,singh?k,et?al.cleavage?site?selection?within?a?foldedsubstrate?by?the?atp-dependent?lon?protease[j].j?biol?chem,2005,280(26):25103-25110.；lu?b,yadav?s,shah?p?g,et?al.roles?for?the?human?atp-dependentlon?protease?in?mitochondrial?dnamaintenance[j].j?biol?chem,2007,282(24):17363-17374.)。據(jù)報道，lonp1的缺陷可能導致與氧化磷酸化(oxphos)嚴重缺陷相關(guān)的經(jīng)典線粒體疾病(peter?b,waddington?c?l,olahovam,et?al.defective?mitochondrialprotease?lonp1?can?cause?classical?mitochondrial?disease[j].hum?mol?genet,2018,27(10):1743-1753.)。

4、中國專利cn118048466a公開了一種基于細菌群落鑒別腐敗尸體死因的方法。通過對因機械性窒息、失血性休克和有機磷中毒死亡的腐敗小鼠尸體不同部位樣本的細菌群落進行16s?rdna測序，通過比對樣本的細菌群落是否趨同以及分析三種死亡原因的微生物標記物來鑒別不同腐敗時期尸體的死因。然而，首先，該方案針對的是腐敗尸體，其次，該方案采用鑒定的樣品為腐敗尸體的皮膚、盲腸組織及其內(nèi)容物、腐敗尸體下方土壤的標識物，需要鑒別的是機械性窒息死亡、失血性休克、有機磷中毒，其核心是微生物標志物，未涉及蛋白質(zhì)或基因表達水平的檢測。而本技術(shù)以腦組織中l(wèi)onp1蛋白的表達水平作為機械性窒息死亡的標志物，屬于分子生物學層面的檢測方法。

5、中國專利cn111349697b公開了tdp-43基因及其產(chǎn)物和衍生物的結(jié)合劑和/或調(diào)節(jié)劑用于診斷、預(yù)防和/或治療tdp-43蛋白病的診斷劑和/或藥物的用途，所述結(jié)合劑和/或調(diào)節(jié)劑包括tdp-43基因、tdp-43基因產(chǎn)物或其衍生物的結(jié)合因子和/或調(diào)控因子，例如降低tdp-43基因表達的調(diào)節(jié)劑或降低tdp-43基因產(chǎn)物或其衍生物含量的調(diào)節(jié)劑，例如線粒體蛋白酶lonp1及相關(guān)調(diào)控因子。其還提供包括所述結(jié)合劑和/或調(diào)節(jié)劑的用于診斷、預(yù)防和/或治療tdp-43蛋白病的試劑盒。然而，該專利中的tdp-43蛋白病(tdp-43proteinopathies)是一組致命性的、累及多種神經(jīng)元包括運動神經(jīng)元的神經(jīng)退行性疾病。該專利并沒有涉及l(fā)onp1是否與機械性窒息死亡的鑒定相關(guān)。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、基于現(xiàn)有技術(shù)中缺乏有效準確的進行機械性窒息死亡鑒定的方案，本發(fā)明提供一種lonp1在制備機械性窒息死亡鑒定產(chǎn)品中的應(yīng)用。

2、本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)：

3、本發(fā)明提供lonp1在制備和/或篩選機械性窒息死亡鑒定產(chǎn)品中的應(yīng)用。

4、在本發(fā)明的一個實施方式中，提供lonp1在制備用于預(yù)測或輔助預(yù)測死者死于機械性窒息概率的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

5、在本發(fā)明的一個實施方式中，提供lonp1在篩選用于預(yù)測或輔助預(yù)測死者死于機械性窒息概率的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

6、在本發(fā)明的一個實施方式中，提供lonp1在制備用于驗證或輔助驗證初步鑒定為機械性窒息死亡的死者死因的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

7、在本發(fā)明的一個實施方式中，提供lonp1在篩選用于驗證或輔助驗證初步鑒定為機械性窒息死亡的死者死因的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

8、在本發(fā)明的一個實施方式中，提供lonp1在制備用于驗證或輔助驗證新的機械性窒息死亡鑒定生物標志物的預(yù)測準確率的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

9、在本發(fā)明的一個實施方式中，提供lonp1在篩選用于驗證或輔助驗證新的機械性窒息死亡鑒定生物標志物的預(yù)測準確率的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

10、本發(fā)明還提供檢測lonp1的物質(zhì)在制備機械性窒息死亡鑒定產(chǎn)品中的應(yīng)用。

11、在本發(fā)明的一個實施方式中，提供檢測lonp1的物質(zhì)在制備用于預(yù)測或輔助預(yù)測死者死于機械性窒息概率的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

12、在本發(fā)明的一個實施方式中，提供檢測lonp1的物質(zhì)在制備用于驗證或輔助驗證初步鑒定為機械性窒息死亡的死者死因的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

13、在本發(fā)明的一個實施方式中，提供檢測lonp1的物質(zhì)在制備用于驗證或輔助驗證新的機械性窒息死亡鑒定生物標志物的預(yù)測準確率的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

14、在本發(fā)明的一個實施方式中，檢測lonp1的物質(zhì)包括特異性針對lonp1的抗體、與lonp1基因mrna互補的rna或dna探針、能夠特異性地結(jié)合lonp1并抑制其活性的小分子抑制劑。

15、在本發(fā)明的一個實施方式中，所述產(chǎn)品包括檢測試劑、檢測試劑盒、膜條或檢測平臺。所述檢測產(chǎn)品可以通過elisa和免疫組化檢測lonp1蛋白的表達水平。

16、所述lonp1蛋白為線粒體離子肽酶1(gene?id：9361)。

17、所述lonp1蛋白來自死亡人體腦組織。

18、本發(fā)明中與機械性窒息死亡區(qū)分的其他死因包括失血性休克、顱腦損傷和其他各類死因。

19、本發(fā)明發(fā)現(xiàn)一種在機械性窒息死亡尸體腦組織中高表達的蛋白lonp1，所述lonp1在缺氧處理的細胞模型和機械性窒息死亡的人類尸體腦組織中的表達水平均顯著高于其他死因組(包括失血性休克死、顱腦損傷死、凍死等)，因此，提供其作為鑒定機械性窒息死亡的標志物。

20、本發(fā)明從lonp1在尸體腦組織中的表達水平變化入手，提供了lonp1可作為鑒定dma的標志物的用途，進而提供lonp1在制備機械性窒息死亡鑒定產(chǎn)品中的應(yīng)用。

21、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明利用尸體腦組織內(nèi)lonp1蛋白水平鑒定機械性窒息死亡，該lonp1蛋白在不同死因間表達差異大，檢測難度低，在不影響正常司法鑒定實踐的同時，通過尸體解剖獲得的少量腦組織樣本即可完成檢測，可以在一定程度上提高機械性窒息死亡死因鑒定的準確度。因此，lonp1可以作為機械性窒息死亡死因鑒定的生物標志物。