本發(fā)明涉及一種優(yōu)化的藤茶發(fā)酵液的制備方法。本發(fā)明還涉及通過所述制備方法制得的藤茶發(fā)酵液和包含所述藤茶發(fā)酵液的化妝品或藥物。本發(fā)明進(jìn)一步涉及所述藤茶發(fā)酵液在制備化妝品或藥物中的用途。
背景技術(shù)：
1、藤茶，民間又稱茅巖莓茶、甘露茶、神仙草等，學(xué)名顯齒蛇葡萄(ampelopsisgrossedentata)，屬于葡萄科蛇葡萄屬植物的嫩莖葉，是一種具有豐富藥用價(jià)值和保健功能的植物資源。藤茶主要分布在中國長江以南各省區(qū)，尤其在湖南、湖北、廣東、廣西、云南等地有較廣泛的種植和利用歷史。藤茶是一種藥食同源的植物，富含大量黃酮類化合物，除黃酮外的主要化學(xué)成分包括多糖、酚類、氨基酸、甾體、揮發(fā)油等。藤茶是目前為止所有被發(fā)現(xiàn)的植物中黃酮含量最高的植物(約為40.3％)，因此也被譽(yù)為“黃酮之王”。這些黃酮類化合物包括二氫楊梅素(dihydromyricetin，dmy)、楊梅素、花旗松素等，其中二氫楊梅素的含量在藤茶總黃酮中占主導(dǎo)地位，約為41.25％。黃酮類成分對(duì)于抗氧化、抗炎、降血糖血脂、抗血栓、保肝、抗腫瘤、抑菌、調(diào)節(jié)免疫等具有重要作用。藤茶中不同部位的黃酮含量存在顯著差異，黃酮類物質(zhì)主要存在于其葉和莖部位，且葉中的黃酮含量是莖中的3～4倍。
2、近年來，中草藥等植物發(fā)酵提取物產(chǎn)品的開發(fā)速度和市場熱度不斷上升。植物發(fā)酵是利用微生物以植物為基質(zhì)進(jìn)行發(fā)酵的過程。微生物發(fā)酵中草藥具有多方面的好處，如：微生物發(fā)酵中草藥可有效促進(jìn)中草藥活性物質(zhì)的釋放，降低中草藥毒性和減少毒副作用。此外，微生物發(fā)酵中草藥結(jié)合了中草藥、益生素以及酶制劑三者的特點(diǎn)，具有“高效、綠色、安全、無殘留”等優(yōu)勢(shì)，有望用于抗生素的替代應(yīng)用。然而目前，中草藥發(fā)酵雖然正逐漸發(fā)展向好，卻仍處于一個(gè)比較初級(jí)的階段，需要利用更先進(jìn)的發(fā)酵技術(shù)進(jìn)行發(fā)展完善。
3、已報(bào)道的關(guān)于涉及或包含黑曲霉發(fā)酵藤茶的現(xiàn)有技術(shù)cn102018083a、cn102578335a、cn117898352a和cn102018083b等，主要應(yīng)用領(lǐng)域?yàn)槭称奉?，利用黑曲霉或包括黑曲霉在?nèi)的菌群經(jīng)過渥堆/固態(tài)發(fā)酵以提升藤茶的顏色和口感，同其他發(fā)酵茶相同，直觀表現(xiàn)為茶褐素等茶色素的增多，酚類物質(zhì)的降解，使顏色變深和口感更加醇厚和柔和。以上技術(shù)若應(yīng)用在化妝品領(lǐng)域，存在著發(fā)酵時(shí)間過長、后續(xù)功效原料提取步驟增加、顏色過深等生產(chǎn)和應(yīng)用方面的困難，且伴隨著傳統(tǒng)茶葉發(fā)酵工藝的進(jìn)行可能會(huì)損失藤茶原有的功效性，有悖作為化妝品原料的最初目的。
4、此外現(xiàn)有技術(shù)cn?115212154a利用纖維素酶和酵母菌對(duì)藤茶進(jìn)行發(fā)酵，其目的是使植物纖維素和植物細(xì)胞壁成分被分解，富集到更多的黃酮和多酚，提高這些有效物質(zhì)的析出，在一定程度上該技術(shù)提高了藤茶的利用度，但不穩(wěn)定、易析出等關(guān)鍵的應(yīng)用性問題依然存在。
5、且藤茶作為外用功效原料的應(yīng)用，其提取物也一直存在著極不穩(wěn)定問題，例如低溫、常溫和高溫下ph的波動(dòng)、顏色的加深。此外提取物溶解性差的問題也難免使用和損耗大量的有機(jī)試劑。藤茶作為極強(qiáng)功效原料，急需解決以上問題來進(jìn)一步解決藤茶在化妝品中的應(yīng)用。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本發(fā)明涉及一種藤茶發(fā)酵液的制備方法和通過所述方法制備得到的藤茶發(fā)酵液。本發(fā)明的制備方法和通過所述方法制備得到的藤茶發(fā)酵液具有以下優(yōu)勢(shì)：
2、(1)通過本發(fā)明的發(fā)酵方法制備得到的藤茶發(fā)酵液在控油、祛痘、抗氧化、抗皺和屏障修護(hù)方面的功效得到了顯著提升；
3、(2)通過本發(fā)明的發(fā)酵方法制備得到的藤茶發(fā)酵液具有美白功效，而未經(jīng)發(fā)酵的藤茶不具有美白作用；
4、(3)通過本發(fā)明的發(fā)酵方法制備得到的藤茶發(fā)酵液的細(xì)胞毒性得到了顯著降低；
5、(4)通過本發(fā)明的發(fā)酵方法制備得到的藤茶發(fā)酵液的顏色較淺，氣味清新；
6、(5)通過本發(fā)明的發(fā)酵方法制備得到的藤茶發(fā)酵液的溶解性較好，不易析出沉淀；
7、(6)通過本發(fā)明的發(fā)酵方法制備得到的藤茶發(fā)酵液的穩(wěn)定性更好，在不同溫度下長時(shí)間放置后ph波動(dòng)極小；
8、(7)本發(fā)明通過對(duì)得到用于發(fā)酵的真菌種子液的培養(yǎng)基進(jìn)行改進(jìn)，使得發(fā)酵時(shí)間從3天縮短至17小時(shí)；
9、(8)本發(fā)明中的發(fā)酵方法生產(chǎn)過程簡便、能耗很低、過程易于控制，較常規(guī)發(fā)酵法更有利于提升藤茶葉的功效與應(yīng)用適配性，且發(fā)酵液顏色較淺、穩(wěn)定性更佳、功效性也有顯著提升。應(yīng)用于化妝品原料的生產(chǎn)，成本低廉，能為化妝品行業(yè)帶來重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
10、本發(fā)明的第一方面涉及一種藤茶發(fā)酵液的制備方法，所述方法包括以下步驟：
11、(a)將曲霉屬(aspergillus)真菌在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到所述真菌的孢子粉；
12、(b)將步驟(a)中得到的所述真菌的孢子粉接種到液體培養(yǎng)基上培養(yǎng)得到所述真菌的種子液；
13、(c)將步驟(b)中所得的種子液接種到藤茶發(fā)酵基質(zhì)中進(jìn)行發(fā)酵，
14、其中步驟(b)中的液體培養(yǎng)基包含葡萄糖、玉米芯粉、藤茶粉，酵母浸粉、(nh4)2so4、kh2po4、cacl2、kcl、mgso4、mnso4和維生素b12，
15、其中所述藤茶發(fā)酵基質(zhì)為藤茶在水中的溶液。
16、本發(fā)明的第二方面涉及一種藤茶發(fā)酵液，所述藤茶發(fā)酵液通過本發(fā)明的第一方面所述的方法制備。
17、本發(fā)明的第三方面涉及根據(jù)本發(fā)明的第二方面所述的藤茶發(fā)酵液在制備化妝品/藥物中的用途。
18、本發(fā)明的第四方面涉及一種化妝品或藥物，其包含根據(jù)本發(fā)明的第二方面所述的藤茶發(fā)酵液，其中所述藤茶發(fā)酵液按重量計(jì)占所述化妝品或藥物重量的0.1％-99％。
19、本發(fā)明的第五方面涉及一種生物體，其為以保藏號(hào)m20242388保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(cctcc)的黑曲霉。
1.一種藤茶發(fā)酵液的制備方法，所述方法包括以下步驟：
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中步驟(b)中的液體培養(yǎng)基包含2-10g/l葡萄糖、20-30g/l玉米芯粉、5-20g/l藤茶粉，2-10g/l酵母浸粉、1-5g/l(nh4)2so4、1-5g/l?kh2po4、0.1-2g/l?cacl2、0.01-0.5g/l?kcl、0.1-1g/l?mgso4、0.01-0.5g/l?mnso4和0.1-2mg/ml維生素b12，所述液體培養(yǎng)基的ph為4.5-6。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述曲霉屬(aspergillus)真菌選自黑曲霉(aspergillus?niger)、白曲霉(aspergillus?candidus)、米曲霉(aspergillus?oryzae)或其一種或多種的組合，優(yōu)選黑曲霉，最優(yōu)選黑曲霉micf_an3127。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中步驟(a)中的固體培養(yǎng)基為馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基，步驟(a)中的固體培養(yǎng)在25-35℃的溫度下培養(yǎng)60-90h。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中步驟(b)中接種的孢子粉與液體培養(yǎng)基之間的比例為(0.5～5)*105cfu/ml，步驟(b)中的液體培養(yǎng)在25-35℃c的溫度下培養(yǎng)60-90h。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中步驟(c)中的藤茶發(fā)酵基質(zhì)為5-20g/l的藤茶在水中的溶液。
7.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中步驟(c)中接入的種子液的量為按體積計(jì)占藤茶發(fā)酵基質(zhì)的體積的5％-15％。
8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中步驟(c)中的發(fā)酵時(shí)間為15-36h。
9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中步驟(c)中的發(fā)酵溫度為25-40℃c；發(fā)酵時(shí)的轉(zhuǎn)速為150-250rpm；發(fā)酵時(shí)的壓力為0.01-0.05mpa；發(fā)酵時(shí)的通氣量為0.1-5l/min。
10.根據(jù)前述權(quán)利要求中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述方法還包括步驟(d)：過濾并利用膜分離步驟(c)所得的藤茶發(fā)酵液得到藤茶發(fā)酵濾液。
11.一種藤茶發(fā)酵液，所述藤茶發(fā)酵液通過權(quán)利要求1-10中任一項(xiàng)所述的方法制備。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的藤茶發(fā)酵液在制備化妝品/藥物中的用途。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的用途，其中所述化妝品/藥物具有控油、抑菌、抗炎、祛痘、抗氧化、美白、抗皺、抗衰和/或屏障修護(hù)作用。
14.一種化妝品或藥物，其包含根據(jù)權(quán)利要求11所述的藤茶發(fā)酵液，其中所述藤茶發(fā)酵液按重量計(jì)占所述化妝品或藥物重量的0.1％-99％。
15.一種生物體，其為以保藏號(hào)m20242388保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(cctcc)的黑曲霉。