本發(fā)明屬于農(nóng)用微生物，涉及生菜根際的促生生防菌及其應(yīng)用，具體涉及尿道假單胞菌及其在促進(jìn)作物生長和防治南方根結(jié)線蟲中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
1、植物根際促生菌（plant?growth-promoting?rhizobacteria，pgpr）是一類通過溶磷、固氮、分泌植物生長激素和拮抗病原微生物以促進(jìn)植物生長的有益根際細(xì)菌。一方面，pgpr作為生物肥料不僅促進(jìn)植物生長，增強(qiáng)植物對非生物脅迫的抗性，而且增強(qiáng)土壤肥力，減少化肥的使用，促進(jìn)農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展；另一方面，pgpr在抑制侵染性病害方面也有重要作用。侵染性植物病害種類繁多，包括疫霉病、炭疽病和根結(jié)線蟲病等，其中植物根結(jié)線蟲危害甚廣。
2、植物主要通過根系直接從土壤吸收營養(yǎng)，植物根部受到病原體侵染往往會導(dǎo)致植物發(fā)病甚至是死亡。目前針對植物病害有多種防治手段，其中化學(xué)農(nóng)藥的使用更為廣泛，但長期使用化學(xué)農(nóng)藥會導(dǎo)致病原體產(chǎn)生抗藥性、造成環(huán)境污染以及危害人畜健康等。在現(xiàn)代農(nóng)業(yè)中，有益微生物已逐步成為化學(xué)殺菌劑的安全替代品，如芽孢桿菌（ bacillus）、假單胞菌（ pseudomonas）。雖然目前分離到的微生物資源豐富，但僅有一部分微生物被制成產(chǎn)品運(yùn)用于實(shí)際生產(chǎn)生活中，因此發(fā)掘高效且新穎的生物資源仍具有重要的意義。
3、曾有報道稱，內(nèi)生菌莫拉維假單胞菌gf-55能夠促進(jìn)玉米生長，假單胞菌屬菌株s10b9對紫花苜蓿鐮刀菌根腐病具有生防作用，銅綠假單胞菌bc1-20能夠很好地防治甜瓜枯萎病并具有促生作用，然而，當(dāng)前假單胞菌屬細(xì)菌促生和生防的平均水平仍有待提高，同時，目前尚未見到探究尿道假單胞菌促進(jìn)作物生長且防治作物南方根結(jié)線蟲的相關(guān)報道。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種不僅對作物具有高效的促生長作用、還對南方根結(jié)線蟲具有高殺線活性、能減少南方根結(jié)線蟲對作物根系的侵染、不會對環(huán)境造成污染的生菜根際的促生生防菌及其應(yīng)用。
2、為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案。
3、一種生菜根際的促生生防菌，所述生菜根際的促生生防菌的名稱為尿道假單胞菌（ pseudomonas?urethralis）gpbc-2，其在中國典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏編號為cctccno：m?20232551，保藏單位地址位于中國湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號中國典型培養(yǎng)物保藏中心（武漢大學(xué)），保藏日期為2023年12月13日。
4、尿道假單胞菌gpbc-2菌株具有下列明顯特征：該菌株為革蘭氏陰性菌，經(jīng)分子生物學(xué)鑒定為假單胞菌，在顯微鏡下菌體呈桿狀，不形成芽孢，在lb瓊脂平板（ph?7.0）上培養(yǎng)24?h，菌落呈淡黃色，表面極光滑且有褶皺，易挑取，在好氧條件生長良好，在pko改良解無機(jī)磷（磷酸三鈣）瓊脂平板上（ph?7.4?±?0.2）培養(yǎng)48?h，在菌落周圍形成透明圈,最適生長溫度28℃。菌株16s?rdna序列如seq?id?no.1所示。
5、作為一個總的技術(shù)構(gòu)思，本發(fā)明還提供一種上述的生菜根際的促生生防菌在促進(jìn)植物生長中的應(yīng)用。
6、上述的應(yīng)用，優(yōu)選的，所述應(yīng)用包括以下步驟：
7、制備od600不低于1的促生生防菌發(fā)酵液，對植物進(jìn)行灌根處理，每株不少于5?ml，每隔5d～7d處理一次，次數(shù)不少于3次。
8、上述的應(yīng)用，優(yōu)選的，所述促生生防菌發(fā)酵液的制備方法包括以下步驟：
9、（1）將促生生防菌接種至lb液體培養(yǎng)基中進(jìn)行活化；
10、（2）將活化后的菌懸液離心、棄上清，用無菌水重懸，得到促生生防菌發(fā)酵液。
11、上述的應(yīng)用，優(yōu)選的，步驟（1）中，所述促生生防菌的接種量為1%～3%，所述活化的條件為：溫度26℃～32℃，轉(zhuǎn)速160rpm～220rpm，恒溫震蕩培養(yǎng)24h～48h；所述lb液體培養(yǎng)基中，蛋白胨濃度為10?g/l，nacl濃度為5?g/l～10?g/l，酵母提取物濃度為5?g/l，ph為7.0，溶劑為水。
12、作為一個總的技術(shù)構(gòu)思，本發(fā)明還提供一種上述的生菜根際的促生生防菌在防治南方根結(jié)線蟲中的應(yīng)用。
13、上述的應(yīng)用，優(yōu)選的，所述應(yīng)用包括以下步驟：
14、制備od600不低于1的促生生防菌發(fā)酵液，對感病植株進(jìn)行灌根處理，每株不少于5ml，隔天處理1次，次數(shù)不少于3次。
15、上述的應(yīng)用，優(yōu)選的，所述促生生防菌發(fā)酵液的制備方法包括以下步驟：
16、（1）將促生生防菌接種至lb液體培養(yǎng)基中進(jìn)行活化；
17、（2）將活化后的菌懸液離心、棄上清，用無菌水重懸，得到促生生防菌發(fā)酵液。
18、上述的應(yīng)用，優(yōu)選的，步驟（1）中，所述促生生防菌的接種量為1%～3%，所述活化的條件為：溫度26℃～32℃，轉(zhuǎn)速160rpm～220rpm，恒溫震蕩培養(yǎng)24h～48h；所述lb液體培養(yǎng)基中，蛋白胨濃度為10?g/l，nacl濃度為5?g/l～10?g/l，酵母提取物濃度為5?g/l，ph為7.0，溶劑為水。
19、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：
20、（1）本發(fā)明的促生生防菌為尿道假單胞菌gpbc-2，其來源于植物根際土壤，獲得途徑簡單，易培養(yǎng)。該促生生防菌菌株不僅對植物（或作物）具有高效的促生長作用，例如，增加株高、莖圍、最大葉長和寬，同時促使根系更加發(fā)達(dá)，還對南方根結(jié)線蟲具有高殺線活性，能減少南方根結(jié)線蟲對植物根系的侵染，有效緩解南方根結(jié)線蟲對植物的危害。該菌株生產(chǎn)成本低，生產(chǎn)過程簡單，不會對環(huán)境造成污染，未來可應(yīng)用于經(jīng)濟(jì)綠色的促生生防雙效菌肥的開發(fā)，實(shí)現(xiàn)農(nóng)作物的安全、無公害生產(chǎn)。
21、（2）本發(fā)明采用gpbc-2菌發(fā)酵液對煙草灌根處理能顯著提高其生物量并明顯改善其農(nóng)藝性狀，株高、根長分別較對照組提高了64.56%和24.48%，地上部和地下部的鮮重以及根冠比，分別較對照組提高了110.23%、272.73%和77.60%。
22、（3）本發(fā)明采用gpbc-2菌發(fā)酵液對南方根結(jié)線蟲處理12?h能達(dá)到近80%的致死率，處理24?h能達(dá)到90%以上的致死率，表明gpbc-2菌株對南方根結(jié)線蟲具有高殺線活性。同時，該菌株能有效緩解南方根結(jié)線蟲對辣椒的危害。
23、一種生菜根際的促生生防菌，所述生菜根際的促生生防菌的名稱為尿道假單胞菌（ pseudomonas?urethralis）gpbc-2，其在中國典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏編號為cctccno：m?20232551，保藏單位地址位于中國湖北省武漢市武昌區(qū)八一路299號中國典型培養(yǎng)物保藏中心（武漢大學(xué)），保藏日期為2023年12月13日。
1.?一種生菜根際的促生生防菌，其特征在于，所述促生生防菌的名稱為尿道假單胞菌（pseudomonas?urethralis）gpbc-2，其在中國典型培養(yǎng)物保藏中心的保藏編號為cctccno：m?20232551。
2.一種如權(quán)利要求1所述的生菜根際的促生生防菌在促進(jìn)植物生長中的應(yīng)用。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用包括以下步驟：
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述促生生防菌發(fā)酵液的制備方法包括以下步驟：
5.?根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟（1）中，所述促生生防菌的接種量為1%～3%，所述活化的條件為：溫度26℃～32℃，轉(zhuǎn)速160rpm～220rpm，恒溫震蕩培養(yǎng)24h～48h；所述lb液體培養(yǎng)基中，蛋白胨濃度為10?g/l，nacl濃度為5?g/l～10?g/l，酵母提取物濃度為5?g/l，ph為7.0，溶劑為水。
6.一種如權(quán)利要求1所述的生菜根際的促生生防菌在防治南方根結(jié)線蟲中的應(yīng)用。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用包括以下步驟：
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述促生生防菌發(fā)酵液的制備方法包括以下步驟：
9.?根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，步驟（1）中，所述促生生防菌的接種量為1%～3%，所述活化的條件為：溫度26℃～32℃，轉(zhuǎn)速160rpm～220rpm，恒溫震蕩培養(yǎng)24h～48h；所述lb液體培養(yǎng)基中，蛋白胨濃度為10?g/l，nacl濃度為5?g/l～10?g/l，酵母提取物濃度為5?g/l，ph為7.0，溶劑為水。