本發(fā)明屬于生物檢測，涉及檢測x-str基因座的復合擴增試劑盒，具體涉及一種同時檢測21個x-str基因座的復合擴增試劑盒及其在個體識別以及親緣關系鑒定中的應用。

背景技術：

1、現(xiàn)有技術記載了在法醫(yī)物證學領域，主要通過檢測生物檢材的遺傳標記實現(xiàn)個體識別和親權鑒定目的，其中主要采用短串聯(lián)重復序列(str)遺傳標記進行檢測分析。

2、據(jù)文獻記載，str遺傳標記散布在整個人類基因組中，其多態(tài)性高、長度適中且便于檢測，是目前法醫(yī)應用最為廣泛的遺傳標記。經(jīng)過多年的發(fā)展，常染色體和y染色體的str遺傳標記無論在數(shù)量還是可應用的檢測試劑盒上都已經(jīng)十分豐富。相比，x染色體的str遺傳標記(x-str)研究較少。

3、研究文獻還記載，女性的一條x染色體能隨機失活形成barr小體，雖然基因表達沉默但在有絲分裂和減數(shù)分裂時期能與未失活的x染色體發(fā)生同源重組。男性個體的x-str以單倍型的形式傳遞給女兒，女性中兩條x染色體在減數(shù)分裂時同源重組，隨機傳遞兩個等位基因中的一個給子女。在同一條染色體上，相近的兩個x-str更容易以單倍型的形式向下遺傳，導致兩個遺傳標記連鎖不平衡，形成比較緊密的連鎖群。因此，x-str的同一染色體定位及其特殊的遺傳規(guī)律，在司法實踐中應用較少。

4、目前，在實踐使用的x-str檢測試劑盒中，一些基因座的連鎖關系不甚清晰，或者使用的連鎖群較少。x染色體上較公認的連鎖群僅有4個，這也導致其在鑒定中的效能較低。因此，業(yè)內(nèi)認為，使用較多的連鎖群，將是提高x-str檢測分析效能的重要手段。

5、基于現(xiàn)有技術的基礎與現(xiàn)狀，本技術的發(fā)明人擬提供一種新的檢測x-str基因座的復合擴增試劑盒，具體涉及一種同時檢測21個x-str基因座的復合擴增試劑盒及其在個體識別以及親緣關系鑒定中的應用。本發(fā)明檢測試劑盒能提高鑒定效能和準確性，適用于法醫(yī)學個體識別以及特殊的親緣關系鑒定，具有良好的法醫(yī)學應用前景。

技術實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于基于現(xiàn)有技術的基礎與現(xiàn)狀，提供一種新的檢測x-str基因座的復合擴增試劑盒，具體涉及一種同時檢測21個x-str基因座的復合擴增試劑盒及其在個體識別以及親緣關系鑒定中的應用。

2、本發(fā)明提供了一個可以檢測7連鎖群含21個x-str遺傳標記的復合擴增檢測體系，可適用于法醫(yī)學個體識別和女性參與的親緣關系鑒定。

3、本發(fā)明篩選了3個新連鎖群上的x-str遺傳標記，根據(jù)已有的4個連鎖群上的遺傳標記，經(jīng)過對遺傳標記的分析，選出21個x-str基因座建立了檢測試劑盒，并具有很高的鑒定效能，命名為fx-21rplex。

4、具體的，本發(fā)明從現(xiàn)有的7個連鎖群中，根據(jù)遺傳標記的多態(tài)性、遺傳連鎖的緊密程度等，篩選獲得21個x-str，包括dxs10135、dxs8378、dxf02、dxf07、dxf08、dxf09、dxs10079、dxf13、dxs10074、dxs10075、dxf15、dxs6803、dxf18、dxf28、dxf29、dxs10103、hprtb、dxs10101、dxs10146、dxs10134、dxs7423。具體信息如下表1所示：

5、表1x-str名稱、連鎖群及染色體定位、物理位置

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8、作為進一步的優(yōu)選方案，21個x-str的引物及使用濃度如下：

9、表2?21個x-str基因座的引物對序列和擴增反應終濃度

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12、作為進一步的優(yōu)選方案，21個x-str分為4組，每對引物中的一條分別使用相應顏色的熒光染料進行標記，具體如下：

13、表3四組x-str熒光標記分布情況

14、 熒光標記 x-str分組 5-fam dxs10103、dxf02、dxf15、dxf13、dxf28和dxf29 hex dxf09、dxs10146、dxf18和dxs10134 trama dxs6803、dxf07、dxs10075、dxs10074、hprtb和dxs8378 rox dxs7423、dxs10079、dxs10101、dxf08和dxs10135

15、作為進一步的優(yōu)選方案，擴增體系的條件如表4和表5所示。

16、表4復合擴增體系推薦的組分

17、 組分 體積 2×multiplexpcrmastermix 12.5μl 5×引物混合物 5μl 模板dna 0.1-5ng 4mg/mlbsa 1μl ddh2o 補足至25μl

18、表5復合擴增體系推薦pcr擴增條件

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21、本發(fā)明中，人類基因組dna來源包括血液/血痕、精液/精斑、唾液斑、汗液、組織、毛發(fā)、骨骼及人類的其他組織和體液。

22、進一步，本發(fā)明提供了一種在個體識別中的應用。

23、進一步，本發(fā)明提供了一種在親緣關系鑒定中的應用。

24、本發(fā)明中，檢測體系具有良好的擴增特異性，每個基因座的峰高均衡；經(jīng)種屬特異性試驗驗證結(jié)果表明，所述檢測體系具有很高的特異性。

25、本發(fā)明中，進行了dna檢測比對研究：

26、以dna標準品9947a作為模板，分別使用argusx-12和fx-21rplex進行x-str分型，結(jié)果表明，兩個試劑盒重疊的位點，分型均一致；

27、使用同一個體來源的血卡和唾液拭子，剪取并使用chelex100抽提dna，作為模板進行x-str分型，結(jié)果表明，兩類檢材分型結(jié)果一致，表明對常規(guī)的生物檢材具有良好的分型效果。

28、本發(fā)明中，進行了親緣關系分析：

29、使用一對母子的血卡，使用chelex100抽提dna，分別進行x-str分型，結(jié)果表明，母子間在每個x-str基因座上均有一個相同的等位基因。

30、本發(fā)明提供了一種同時檢測21個x-str基因座的復合擴增試劑盒。本發(fā)明的檢測試劑盒中使用7個連鎖群，克服了現(xiàn)有技術中基因座的連鎖關系不甚清晰，或者使用的連鎖群較少，x染色體上公認的連鎖群少導致其在鑒定中的效能較低的缺陷。本發(fā)明檢測試劑盒能提高鑒定效能和準確性，適用于法醫(yī)學個體識別以及特殊的親緣關系鑒定，具有良好的法醫(yī)學應用前景。