本公開涉及體外診斷免疫檢測領(lǐng)域，特別涉及一種堿性磷酸酶促化學發(fā)光底物液及化學發(fā)光檢測方法。

背景技術(shù)：

1、化學發(fā)光是指在發(fā)生化學反應(yīng)的過程中，特定物質(zhì)吸收部分化學能達到激發(fā)態(tài)，在回到基態(tài)的過程中釋放的能量以光子的形式釋放出來，從而產(chǎn)生發(fā)光的現(xiàn)象?；瘜W發(fā)光免疫分析(chemiluminescence?immunoassay，clia)是指將高靈敏度的化學發(fā)光技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)結(jié)合，用于檢測抗原、抗體、激素、脂肪酸、維生素和藥物等的分析技術(shù)?；瘜W發(fā)光免疫分析法既有化學發(fā)光的高靈敏性，又有酶聯(lián)免疫反應(yīng)的操作簡單、反應(yīng)快速的特點，易于標準化實驗操作，現(xiàn)已廣泛應(yīng)用于生物學、醫(yī)學研究和臨床診斷。

2、當前的免疫分析檢測中，有些被測物在臨床樣本中濃度差異大，甚至可跨越105～106的數(shù)量級。目前一般采用對高濃度樣本先進行稀釋再測試的方法，存在測試周期長，測試成本高，稀釋干擾大，操作繁瑣等弊端。

3、因此，對這樣的臨床檢測項目的檢測方法存在進一步改進的需求。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本公開的目的在于提供一種具有寬線性的化學發(fā)光底物液以及化學發(fā)光檢測方法。

2、為此，本公開第一方面提供一種化學發(fā)光底物液，包括化學發(fā)光底物、熒光素和水溶性高分子季銨鹽，其中所述化學發(fā)光底物選自氯代的具有螺-金剛烷取代基的二氧雜環(huán)丁烷類化合物。

3、根據(jù)一些實施方式，所述氯代的具有螺-金剛烷取代基的二氧雜環(huán)丁烷類化合物為adp-star和cdp-star。

4、根據(jù)一些實施方式，所述水溶性高分子季銨鹽選自含聚乙烯基的季銨鹽。優(yōu)選地，所述水溶性高分子季銨鹽選自聚乙烯基芐基-三甲基氯化銨、聚乙烯基芐基-芐基二甲基氯化銨和聚乙烯基芐基-三丁基氯化銨中的至少一種。

5、根據(jù)一些實施方式，所述化學發(fā)光底物液的線性檢測上限與線性檢測下限的每秒產(chǎn)生的光子數(shù)的比值在3萬以上，優(yōu)選5萬以上。

6、根據(jù)一些實施方式，所述化學發(fā)光底物液的線性檢測下限小于或等于3000光子數(shù)/秒，線性檢測上限大于或等于100m光子數(shù)/秒。

7、根據(jù)一些較佳的實施方式，所述化學發(fā)光底物液的線性檢測下限為1000～3000光子數(shù)/秒，優(yōu)選為1000～2000光子數(shù)/秒；所述化學發(fā)光底物液的線性檢測上限為100m～200m光子數(shù)/秒，優(yōu)選為120m～200m光子數(shù)/秒。

8、根據(jù)一些實施方式，所述化學發(fā)光底物液包括50-500mg/l的化學發(fā)光底物，30-500mg/l的熒光素和1-10g/l的水溶性高分子季銨鹽。

9、根據(jù)一些實施方式，所述化學發(fā)光底物液包括150-250mg/l的化學發(fā)光底物，150-250mg/l的熒光素和3-7g/l的水溶性高分子季銨鹽。

10、根據(jù)一些實施方式，所述化學發(fā)光底物液進一步包括緩沖劑和防腐劑。

11、根據(jù)一些實施方式，所述緩沖劑選自tris-hcl、amp-hcl、ampd-hcl、dea-hcl、ches-hcl、硼酸-naoh、甘氨酸-naoh緩沖體系中的至少一種。優(yōu)選地，所述緩沖劑選自amp-hcl緩沖體系。

12、根據(jù)一些實施方式，所述防腐劑選自疊氮化鈉、proclin系列、山梨酸鉀、苯甲酸鈉中的至少一種。

13、根據(jù)一些實施方式，所述化學發(fā)光底物液通過堿性磷酸酶催化而化學發(fā)光。

14、根據(jù)一些實施方式，所述堿性磷酸酶濃度低至10-19mol/l。

15、根據(jù)一些實施方式，所述化學發(fā)光底物液用于檢測待測樣本中人絨毛促性腺素hcg。

16、根據(jù)一些實施方式，所述待測樣本中的所述人絨毛促性腺素hcg的濃度范圍為1～200000miu/ml。優(yōu)選，所述待測樣本是血液樣本。

17、根據(jù)一些實施方式，所述化學發(fā)光底物液用于用雙抗體夾心法檢測所述待測樣本中人絨毛促性腺素hcg。

18、根據(jù)一些實施方式，所述雙抗體夾心法中使用包被有hcg抗體的超順磁性微粒作為捕獲試劑，使用堿性磷酸酶標記的hcg抗體作為標記物。

19、根據(jù)本公開的第二方面，提供一種化學發(fā)光檢測方法，包括以下步驟：

20、將待測樣本與檢測試劑混合，所述檢測試劑中包括能與待測物結(jié)合的捕獲試劑和堿性磷酸酶標記物，從而得到堿性磷酸酶標記的免疫復合物；

21、將所述堿性磷酸酶標記的免疫復合物與以上第一方面中任意實施方式所述的化學發(fā)光底物液混合，從而得到混合液；

22、測定所述混合液的光信號，并基于所述光信號獲得所述待測樣本中的待測物的分析結(jié)果。

23、根據(jù)本公開的第三方面，提供一種化學發(fā)光檢測方法，包括以下步驟：

24、將待測樣本與檢測試劑混合，所述檢測試劑中包括能與待測物結(jié)合的捕獲試劑和堿性磷酸酶標記物，從而得到堿性磷酸酶標記的免疫復合物；

25、將所述堿性磷酸酶標記的免疫復合物與化學發(fā)光底物液混合，從而得到混合液；

26、測定所述混合液的光信號，并基于所述光信號獲得所述待測樣本的分析結(jié)果，

27、其中，所述化學發(fā)光底物液包括化學發(fā)光底物、熒光劑和表面活性劑，

28、其中，所述化學發(fā)光底物液的線性檢測上限與線性檢測下限的每秒產(chǎn)生的光子數(shù)的比值在3萬以上，或者，所述化學發(fā)光底物液的線性檢測下限小于或等于2000光子數(shù)/秒，線性檢測上限大于或等于100m光子數(shù)/秒。

29、根據(jù)一些實施方式，所述化學發(fā)光底物液的線性檢測上限與線性檢測下限的每秒產(chǎn)生的光子數(shù)的比值在5萬以上，或者，所述化學發(fā)光底物液的線性檢測下限為1000～3000光子數(shù)/秒，優(yōu)選為1000～2000光子數(shù)/秒；所述化學發(fā)光底物液的線性檢測上限為100m～200m光子數(shù)/秒，優(yōu)選為120m～200m光子數(shù)/秒。

30、根據(jù)一些實施方式，所述測定混合液的光信號包括用光度計測定所述混合液的光信號，所述光度計的線性檢測下限小于或等于2000光子數(shù)/秒，所述光度計的線性檢測上限大于或等于100m光子數(shù)/秒。

31、根據(jù)一些實施方式，所述化學發(fā)光底物為二氧雜環(huán)丁烷類化合物。優(yōu)選地，二氧雜環(huán)丁烷類化合物選自氯代的具有螺-金剛烷取代基的二氧雜環(huán)丁烷類化合物，所述熒光劑選自熒光素和/或羧基取代的熒光素，所述表面活性劑選自水溶性高分子季銨鹽類表面活性劑。

32、根據(jù)一些較佳實施方式，所述氯代的具有螺-金剛烷取代基的二氧雜環(huán)丁烷類化合物為adp-star和cdp-star；所述羧基取代的熒光素為5-羧基熒光素、6-羧基熒光素和5(6)-羧基熒光素。

33、根據(jù)一些較佳實施方式，所述水溶性高分子季銨鹽是含聚乙烯基的季銨鹽，優(yōu)選聚乙烯基芐基-三甲基氯化銨、聚乙烯基芐基-芐基二甲基氯化銨和聚乙烯基芐基-三丁基氯化銨中的至少一種。

34、根據(jù)一些實施方式，所述化學發(fā)光底物液包括50-500mg/l的化學發(fā)光底物，30-500mg/l的熒光劑和1-10g/l的水溶性高分子季銨鹽。優(yōu)選地，所述化學發(fā)光底物液包括150-250mg/l的化學發(fā)光底物，150-250mg/l的熒光劑和3-7g/l的水溶性高分子季銨鹽。

35、根據(jù)一些實施方式，在上述方法中，所述待測物為人絨毛促性腺素hcg。優(yōu)選地，所述待測樣本中hcg的濃度范圍為1～200000miu/ml。更優(yōu)選地，所述方法為雙抗體夾心法。尤其優(yōu)選地，所述捕獲試劑為包被有hcg抗體的超順磁性微粒。

36、本公開的化學發(fā)光底物液通過化學發(fā)光底物、熒光劑和表面活性劑的組合，能夠?qū)崿F(xiàn)檢測上限與檢測下限的每秒產(chǎn)生的光子數(shù)的比值達5萬以上，在較佳的實施方式中甚至可達6萬以上的寬線性，從而可利用諸如堿性磷酸酶的酶促發(fā)光免疫檢測體系實現(xiàn)對低濃度樣本和高濃度樣本的準確檢測，而無需先識別樣本中被測物濃度是否超過檢測限，再進行稀釋，簡化了檢測步驟，提高了檢測效率。