本發(fā)明涉及人乳頭狀瘤病毒(hpv)疫苗、誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的方法、和針對hpv6和/或hpv11對個體進(jìn)行預(yù)防性和/或治療性免疫的方法，以及預(yù)防或治療復(fù)發(fā)性呼吸道乳頭狀瘤病(rrp)的方法。

背景技術(shù)：

1、人乳頭狀瘤病毒相關(guān)(hpv+)惡性腫瘤是新興的全球流行病(gradishar等人,jnccn?2014；12(4):542-90)。hpv相關(guān)的上呼吸消化道癌前病變和惡性腫瘤可能發(fā)生在口咽部、喉部以及上呼吸道。雖然hpv6和hpv11在大多數(shù)與呼吸道和消化道有關(guān)的惡性腫瘤的病因?qū)W中的作用尚不清楚，但是它們被廣泛認(rèn)為與復(fù)發(fā)性呼吸道乳頭狀瘤病(rrp)有因果關(guān)系(mounts等人,pnas?usa?1982；79(17):5425-9；gissmann等人,pnas?usa?1983；80(2):560-3；bonagura等人,apmis.2010；118(6-7):455-70)，而復(fù)發(fā)性呼吸道乳頭狀瘤病是喉上皮最常見的良性腫瘤。rrp是罕見的，在美國，發(fā)病率估計為每100,000個成年人中有1.8人(winton等人,nejm?2005；352(25):2589-97)。盡管大多數(shù)病變是良性的，但一些病變會發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化，并且患有rrp的患者發(fā)展為喉瘤形成和癌癥的風(fēng)險更高(omland等人,plosone.2014；9(6):e99114)。

2、復(fù)發(fā)性呼吸道乳頭狀瘤病仍然是一種困擾兒童和成人的具有挑戰(zhàn)性的疾病，據(jù)估計，在美國，每年與該疾病相關(guān)的醫(yī)療費用高達(dá)1.2億美元，每位患者每年的費用接近6萬美元。盡管rrp的發(fā)病率有所下降，但它仍然是兒童中最常見的喉部良性腫瘤。rrp具有多部位高復(fù)發(fā)率、對患者生活質(zhì)量造成沉重負(fù)擔(dān)以及相關(guān)醫(yī)療費用高昂等獨特特點。因此，需要有更優(yōu)的用于治療或預(yù)防rrp的組合物和方法。本發(fā)明滿足了這一尚未得到滿足的需求。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本文提供的是通過以下誘導(dǎo)受試者的免疫應(yīng)答的方法：向該受試者施用有效量的編碼人乳頭狀瘤病毒(hpv)抗原的核酸分子，該hpv抗原包含hpv6抗原結(jié)構(gòu)域和hpv11抗原結(jié)構(gòu)域，其中該hpv6抗原結(jié)構(gòu)域是hpv6?e6-e7融合抗原，并且其中該hpv11抗原結(jié)構(gòu)域是hpv11?e6-e7融合抗原，從而誘導(dǎo)免疫應(yīng)答。還提供了預(yù)防性或治療性使受試者針對hpv6和/或hpv11免疫的方法，該方法包括向該受試者施用有效量的編碼人乳頭狀瘤病毒(hpv)抗原的核酸分子，該hpv抗原包含hpv6抗原結(jié)構(gòu)域和hpv11抗原結(jié)構(gòu)域，其中該hpv6抗原結(jié)構(gòu)域是hpv6?e6-e7融合抗原，并且其中該hpv11抗原結(jié)構(gòu)域是hpv11?e6-e7融合抗原，從而誘導(dǎo)針對hpv6、hpv11或兩者的免疫應(yīng)答。進(jìn)一步提供的是用于治療或預(yù)防受試者的復(fù)發(fā)性呼吸道乳頭狀瘤病(rrp)的方法，該方法包括向受試者施用有效量的編碼人乳頭狀瘤病毒(hpv)抗原的核酸分子，該hpv抗原包含hpv6抗原結(jié)構(gòu)域和hpv11抗原結(jié)構(gòu)域，其中該hpv6抗原結(jié)構(gòu)域是hpv6?e6-e7融合抗原，并且其中該hpv11抗原結(jié)構(gòu)域是hpv11?e6-e7融合抗原，從而治療或預(yù)防rrp。

2、施用可以是皮內(nèi)或肌內(nèi)的。根據(jù)一些實施例，施用是經(jīng)由標(biāo)準(zhǔn)針或通過側(cè)孔針注射的。施用可以進(jìn)一步涉及電穿孔。

3、根據(jù)該方法的一些實施例，相對于在向被診斷患有rrp的人類受試者的群體施用藥物組合物之前52周內(nèi)rrp外科手術(shù)干預(yù)的數(shù)量，在被診斷患有rrp的人類受試者的群體中施用藥物組合物之后52周內(nèi)實現(xiàn)了rrp外科手術(shù)干預(yù)的數(shù)量的減少。例如，該方法可以使得在施用藥物組合物之后52周內(nèi)，被診斷患有rrp的人類受試者的群體中的至少約76％表現(xiàn)出相對于在向被診斷患有rrp的人類受試者的群體施用藥物組合物之前52周內(nèi)rrp外科手術(shù)干預(yù)的數(shù)量，rrp外科手術(shù)干預(yù)的數(shù)量減少。該方法可以使得在施用藥物組合物之后52周內(nèi)，被診斷患有rrp的人類受試者的群體中的約70％至約95％、約75％至約85％、約75％至約80％、約75％、約76％、約77％、約78％、約79％或約80％表現(xiàn)出相對于在向被診斷患有rrp的人類受試者的群體施用藥物組合物之前52周內(nèi)rrp外科手術(shù)干預(yù)的數(shù)量，rrp外科手術(shù)干預(yù)的數(shù)量減少。根據(jù)一些實施例，在施用藥物組合物之后52周內(nèi)，rrp外科手術(shù)干預(yù)的數(shù)量的中值減少為約三次。根據(jù)所公開的方法的一些實施例，在施用藥物組合物之后52周內(nèi)，被診斷患有rrp的人類受試者的群體中的約90％表現(xiàn)出相對于在向被診斷患有rrp的人類受試者的群體施用藥物組合物之前52周內(nèi)rrp外科手術(shù)干預(yù)的數(shù)量，rrp外科手術(shù)干預(yù)的數(shù)量減少。

4、根據(jù)一些實施例，該方法使得hpv6和hpv11特異性活化的cd4和/或活化的溶細(xì)胞型cd8?t細(xì)胞的數(shù)量增加。

5、在一些實施例中，相對于在向被診斷患有rrp的人類受試者的群體施用藥物組合物之前52周內(nèi)表達(dá)cd38的hpv-6和hpv-11特異性cd4細(xì)胞的數(shù)量，該方法使得在被診斷患有rrp的人類受試者的群體中的約85％中施用藥物組合物之后52周內(nèi)表達(dá)cd38的hpv-6和hpv-11特異性cd4細(xì)胞的數(shù)量增加。相對于在向被診斷患有rrp的人類受試者的群體施用藥物組合物之前52周內(nèi)表達(dá)cd38的hpv-6和hpv-11特異性cd4細(xì)胞的數(shù)量，該方法可以使得在被診斷患有rrp的人類受試者的群體中的約70％至約95％、約75％至約90％、約85％至約90％、約80％、約81％、約82％、約83％、約84％、約85％、約86％、約87％、約88％或約89％中施用藥物組合物之后52周內(nèi)表達(dá)cd38的hpv-6和hpv-11特異性cd4細(xì)胞的數(shù)量增加。

6、在一些實施例中，相對于在向被診斷患有rrp的人類受試者的群體施用藥物組合物之前52周內(nèi)表達(dá)cd38、顆粒酶a、顆粒酶b和穿孔素的hpv6和hpv11?e6特異性cd8細(xì)胞的數(shù)量，該方法使得在施用藥物組合物之后52周內(nèi)表達(dá)cd38、顆粒酶a、顆粒酶b和穿孔素的hpv6和hpv11?e6特異性cd8細(xì)胞的數(shù)量增加。例如，相對于向被診斷患有rrp的人類受試者的群體施用藥物組合物之前52周內(nèi)表達(dá)cd38、顆粒酶a、顆粒酶b和穿孔素的hpv6和hpv11?e6特異性cd8細(xì)胞的數(shù)量，該方法可以使得在被診斷患有rrp的人類受試者的群體中的約85％中施用藥物組合物之后52周內(nèi)表達(dá)cd38、顆粒酶a、顆粒酶b和穿孔素的hpv6和hpv11?e6特異性cd8細(xì)胞的數(shù)量增加。相對于向被診斷患有rrp的人類受試者的群體施用藥物組合物之前52周內(nèi)表達(dá)cd38、顆粒酶a、顆粒酶b和穿孔素的hpv6和hpv11?e6特異性cd8細(xì)胞的數(shù)量，該方法可以使得在被診斷患有rrp的人類受試者的群體中的約70％至約95％、約75％至約90％、約85％至約90％、約80％、約81％、約82％、約83％、約84％、約85％、約86％、約87％、約88％或約89％中施用藥物組合物之后52周內(nèi)表達(dá)cd38、顆粒酶a、顆粒酶b和穿孔素的hpv6和hpv11?e6特異性cd8細(xì)胞的數(shù)量增加。

7、本文進(jìn)一步提供的是有效量的編碼人乳頭狀瘤病毒(hpv)抗原的核酸分子在誘導(dǎo)受試者的免疫應(yīng)答中的用途，該hpv抗原包含hpv6抗原結(jié)構(gòu)域和hpv11抗原結(jié)構(gòu)域，其中該hpv6抗原結(jié)構(gòu)域是hpv6?e6-e7融合抗原，并且其中該hpv11抗原結(jié)構(gòu)域是hpv11?e6-e7融合抗原。還提供了有效量的編碼人乳頭狀瘤病毒(hpv)抗原的核酸分子在預(yù)防性或治療性使受試者針對hpv6和/或hpv11免疫中的用途，該hpv抗原包含hpv6抗原結(jié)構(gòu)域和hpv11抗原結(jié)構(gòu)域，其中該hpv6抗原結(jié)構(gòu)域是hpv6?e6-e7融合抗原，并且其中該hpv11抗原結(jié)構(gòu)域是hpv11?e6-e7融合抗原。另外公開的是有效量的編碼人乳頭狀瘤病毒(hpv)抗原的核酸分子在用于治療或預(yù)防受試者的復(fù)發(fā)性呼吸道乳頭狀瘤病(rrp)的方法中使用的用途，該hpv抗原包含hpv6抗原結(jié)構(gòu)域和hpv11抗原結(jié)構(gòu)域，其中該hpv6抗原結(jié)構(gòu)域是hpv6?e6-e7融合抗原，并且其中該hpv11抗原結(jié)構(gòu)域是hpv11?e6-e7融合抗原。

8、進(jìn)一步提供的是編碼人乳頭狀瘤病毒(hpv)抗原的核酸分子在以下各項中的用途，該hpv抗原包含hpv6抗原結(jié)構(gòu)域和hpv11抗原結(jié)構(gòu)域，其中該hpv6抗原結(jié)構(gòu)域是hpv6e6-e7融合抗原，并且其中該hpv11抗原結(jié)構(gòu)域是hpv11?e6-e7融合抗原：制備用于誘導(dǎo)受試者的免疫應(yīng)答的藥物；制備用于預(yù)防性或治療性使受試者針對hpv6和/或hpv11免疫的藥物；或制備用于治療或預(yù)防受試者的復(fù)發(fā)性呼吸道乳頭狀瘤病(rrp)的藥物。

9、如本文公開的供使用的核酸分子可以與藥學(xué)上可接受的賦形劑一起調(diào)配在藥物組合物中。核酸分子可以被調(diào)配用于皮內(nèi)或肌內(nèi)注射，并且任選地用于電穿孔。根據(jù)一些實施例，核酸分子可以被調(diào)配用于通過標(biāo)準(zhǔn)針或通過側(cè)孔針肌內(nèi)施用。

10、根據(jù)所公開的用途的一些實施例，相對于在向被診斷患有rrp的人類受試者的群體施用藥物組合物之前52周內(nèi)rrp外科手術(shù)干預(yù)的數(shù)量，該用途使得在被診斷患有rrp的人類受試者的群體中施用藥物組合物之后52周內(nèi)rrp外科手術(shù)干預(yù)的數(shù)量減少。例如，該用途可以使得在施用藥物組合物之后52周內(nèi)，被診斷患有rrp的人類受試者的群體中的至少約76％表現(xiàn)出相對于在向被診斷患有rrp的人類受試者的群體施用藥物組合物之前52周內(nèi)rrp外科手術(shù)干預(yù)的數(shù)量，rrp外科手術(shù)干預(yù)的數(shù)量減少。該用途可以使得在施用藥物組合物之后52周內(nèi)，被診斷患有rrp的人類受試者的群體中的約70％至約95％、約75％至約85％、約75％至約80％、約75％、約76％、約77％、約78％、約79％或約80％表現(xiàn)出相對于在向被診斷患有rrp的人類受試者的群體施用藥物組合物之前52周內(nèi)rrp外科手術(shù)干預(yù)的數(shù)量，rrp外科手術(shù)干預(yù)的數(shù)量減少。在一些實施例中，在施用藥物組合物之后52周內(nèi)，rrp外科手術(shù)干預(yù)的數(shù)量的中值減少為約三次。

11、根據(jù)一些實施例，相對于在向被診斷患有rrp的人類受試者的群體施用藥物組合物之前52周內(nèi)表達(dá)cd38的ino-3107特異性cd4細(xì)胞的數(shù)量，該用途使得在被診斷患有rrp的人類受試者的群體中的至少約85％中施用藥物組合物之后52周內(nèi)表達(dá)cd38的hpv-6和hpv-11特異性cd4細(xì)胞的數(shù)量增加。相對于在向被診斷患有rrp的人類受試者的群體施用藥物組合物之前52周內(nèi)表達(dá)cd38的hpv-6和hpv-11特異性cd4細(xì)胞的數(shù)量，該用途可以使得在被診斷患有rrp的人類受試者的群體中的約70％至約95％、約75％至約90％、約85％至約90％、約80％、約81％、約82％、約83％、約84％、約85％、約86％、約87％、約88％或約89％中施用藥物組合物之后52周內(nèi)表達(dá)cd38的hpv-6和hpv-11特異性cd4細(xì)胞的數(shù)量增加。

12、在一些實施例中，相對于向被診斷患有rrp的人類受試者的群體施用藥物組合物之前52周內(nèi)表達(dá)cd38、顆粒酶a、顆粒酶b和穿孔素的hpv6和hpv11?e6特異性cd8細(xì)胞的數(shù)量，該用途可以使得在被診斷患有rrp的人類受試者的群體中的至少約85％中施用藥物組合物之后52周內(nèi)表達(dá)cd38、顆粒酶a、顆粒酶b和穿孔素的hpv6和hpv11e6特異性cd8細(xì)胞的數(shù)量增加。相對于向被診斷患有rrp的人類受試者的群體施用藥物組合物之前52周內(nèi)表達(dá)cd38、顆粒酶a、顆粒酶b和穿孔素的hpv6和hpv11?e6特異性cd8細(xì)胞的數(shù)量，該用途可以使得在被診斷患有rrp的人類受試者的群體中的約70％至約95％、約75％至約90％、約85％至約90％、約80％、約81％、約82％、約83％、約84％、約85％、約86％、約87％、約88％或約89％中施用藥物組合物之后52周內(nèi)表達(dá)cd38、顆粒酶a、顆粒酶b和穿孔素的hpv6和hpv11?e6特異性cd8細(xì)胞的數(shù)量增加。

13、根據(jù)一些實施例，在施用藥物組合物之后52周內(nèi)，被診斷患有rrp的人類受試者的群體中的至少約90％表現(xiàn)出相對于在向被診斷患有rrp的人類受試者的群體施用藥物組合物之前52周內(nèi)rrp外科手術(shù)干預(yù)的數(shù)量，rrp外科手術(shù)干預(yù)的數(shù)量減少。根據(jù)一些實施例，在施用藥物組合物之后52周內(nèi)，被診斷患有rrp的人類受試者的群體中的約70％至約95％、約75％至約90％、約85％至約90％、約80％、約81％、約82％、約83％、約84％、約85％、約86％、約87％、約88％、約89％、約90％、約91％、約92％、約93％、約94％或約95％表現(xiàn)出相對于在向被診斷患有rrp的人類受試者的群體施用藥物組合物之前52周內(nèi)rrp外科手術(shù)干預(yù)的數(shù)量，rrp外科手術(shù)干預(yù)的數(shù)量減少。

14、根據(jù)一些實施例，該用途使得hpv6和hpv11特異性活化的cd4和活化的溶細(xì)胞型cd8?t細(xì)胞的數(shù)量增加。

15、rrp可以是幼年型rrp或成年型rrp。

16、根據(jù)所公開的方法和用途的一些實施例，該hpv抗原包含seq?id?no:1或seqidno:11的氨基酸序列；或與seq?id?no:1或seq?id?no:11至少95％同源的氨基酸序列。該核酸分子可以包含：與seq?id?no:2或seq?id?no:12至少95％同源的核苷酸序列；seq?idno:2的核苷酸序列；或seq?id?no?12的核苷酸序列。編碼hpv11抗原結(jié)構(gòu)域的核酸序列可以位于編碼hpv6抗原結(jié)構(gòu)域的核酸序列的5'。在一些實施例中，hpv6抗原結(jié)構(gòu)域和hpv11抗原結(jié)構(gòu)域被一個或多個翻譯后切割位點、一個或多個翻譯跳躍位點或兩者分開。hpv6?e6抗原結(jié)構(gòu)域和hpv6?e7抗原結(jié)構(gòu)域可以被一個或多個翻譯后切割位點、一個或多個翻譯跳躍位點或兩者分開。類似地，hpv11?e6抗原結(jié)構(gòu)域和hpv11e7抗原結(jié)構(gòu)域可以被一個或多個翻譯后切割位點、一個或多個翻譯跳躍位點或兩者分開。

17、根據(jù)所公開的方法和用途的核酸分子可以是表達(dá)載體，任選地是dna質(zhì)粒。在一些實施例中，表達(dá)載體包含seq?id?no:3的核苷酸序列。

18、該核酸分子可以是進(jìn)一步包含藥學(xué)上可接受的賦形劑的藥物組合物的組分。藥學(xué)上可接受的賦形劑可以包含緩沖液，任選地是鹽水-檸檬酸鈉緩沖液。在一些實施例中，藥物組合物包含每毫升緩沖液6mg的編碼hpv抗原的載體和每毫升緩沖液0.25mg的編碼il-12的p35亞基、il-1的p40亞基或兩者的載體。例如，藥物組合物可以包含每毫升緩沖液6mg的pgx3024和每毫升緩沖液0.25mg的pgx6010。