1.主權項：
2.嚴格篩選供者，排除泌尿系統(tǒng)疾病、傳染病、代謝性疾病和惡性腫瘤；
3.將培養(yǎng)瓶中尿樣即時分裝至4個50?ml無菌離心管，1500?r/min室溫離心10?min后棄上清，每管均剩余約0.3～0.5?ml液體，每管加入3?ml干細胞基礎培養(yǎng)液重懸沉淀。輕輕吹打混勻后的細胞懸液加至6孔板或者24孔板中，每孔加約0.5?ml懸液和1?ml干細胞培養(yǎng)液，在培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)，6?h后觀察細胞貼壁情況，無異常情況下24?h后更換huscs完全培養(yǎng)基（半換液），將未貼壁的細胞棄除，完成初步篩選。
4.繼續(xù)培養(yǎng)，每隔2天換液，6、24孔板分別加入培養(yǎng)液1、0.5?ml，進行不斷地篩選純化。同時每天通過普通光學顯微鏡觀察細胞的形態(tài)、生長情況及細菌污染情況，若出現(xiàn)細菌污染及時清理，待貼壁細胞融合率至90％時消化傳代，此為p0代huscs。
5.間充質干細胞的擴增和傳代：
6.在培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)，2～3天換液1次，待細胞融合至90％時傳代。
7.胰酶消化傳代：再次傳代時，以1:?3比例傳代至6孔板。2～3天換液1次，待細胞融合至90％時再次傳代。
8.尿液干細胞的鑒定：
9.干細胞表面抗原的表達：cd16、cd44、cd90、cd73、cd105高表達，cd19、cd34、cd45、cd11b、hla-dr低表達或者不表達。
10.流式細胞儀驗證細胞純度達到90％以上，化驗排除常見的傳染病，并排除細菌，?支原體污染，即是符合標準，即得上皮細胞和間充質干細胞的混合物。
11.干細胞向成骨、成脂方向的誘導分化能力。
12.成骨誘導液配制：干細胞基礎培養(yǎng)基、β-甘油磷酸鈉、維生素c、地塞米松。
13.成脂誘導液配制：干細胞基礎培養(yǎng)基、胰島素、吲哚美辛、地塞米松、3-異丁基甲基黃嘌呤。
14.6孔板中第3代的干細胞融合至80～90％時，每孔加入2?ml成骨/成脂誘導液，并標記。21天后進行油紅o染色和茜素紅染色以判定誘導結果。
15.尿液干細胞的冷凍保存和復蘇方法，步驟如下：
16.使用細胞前，將凍存管中細胞在37℃水浴中1?min內迅速解凍，加入含有6?ml培養(yǎng)液的15?ml離心管中，1500?r/min離心3?min，再懸浮于pbs中，制備成細胞密度為（1～3）×106/ml的細胞懸液以用作包括移植在內的實驗和臨床應用，使用之前一直保存在4℃。