本發(fā)明涉及植物基因工程領域，尤其涉及一種ntcyp94b3基因增強煙草植株抗蟲性的方法以及應用。
背景技術：
1、蟲害是造成農(nóng)作物減產(chǎn)的最主要的環(huán)境因素，目前針對蟲害的防治仍以化學防治為主，盡管化學防治技術效果較好，但長期使用導致的農(nóng)藥殘留、害蟲抗藥性增加以及生態(tài)環(huán)境問題日益突出。通過調(diào)控抗蟲基因的表達，培育抗蟲品種，提高作物自身的抗蟲性，是一種更加經(jīng)濟有效而且綠色環(huán)保的方式，有利于農(nóng)業(yè)的可持續(xù)發(fā)展。
2、相關技術中雖然已有一些抗蟲基因的相關報道，但大多難以推廣應用，昆蟲還會對殺蟲蛋白產(chǎn)生抗性；抗蟲基因的抗蟲譜窄；外源基因在植物體內(nèi)的表達存在基因“沉默”現(xiàn)象等等，不能滿足農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的蟲害防治需求。因此，研發(fā)新的抗蟲基因或充分利用現(xiàn)有抗蟲基因資源，通過基因重組或融合技術提高植物對害蟲的抗性十分必要。
技術實現(xiàn)思路
1、有鑒于此，為了至少部分地解決上述提及的技術問題中的至少之一，本發(fā)明提供了ntcyp94b3基因增強煙草植株抗蟲性的方法以及應用。
2、根據(jù)本發(fā)明一個方面的實施方案，提供了一種增強煙草植株抗蟲性的方法，其包括降低煙草中ntcyp94b3-1基因和/或ntcyp94b3-2基因的表達水平的步驟。
3、根據(jù)本發(fā)明的實施方案，ntcyp94b3-1基因的堿基序列如seq?id?no.1所示；ntcyp94b3-2基因的堿基序列如seq?id?no.2所示。
4、根據(jù)本發(fā)明的實施方案，上述方法包括敲除煙草中ntcyp94b3-1基因和/或ntcyp94b3-2基因。
5、根據(jù)本發(fā)明的實施方案，上述方法包括通過crispr-cas9、鋅指核酸酶、talens或rnai基因沉默技術降低煙草中ntcyp94b3-1基因和/或ntcyp94b3-2基因的表達水平或敲除ntcyp94b3-1基因和/或ntcyp94b3-2基因。
6、根據(jù)本發(fā)明的實施方案，降低煙草中ntcyp94b3-1基因和/或ntcyp94b3-2基因的表達水平或敲除ntcyp94b3-1基因和/或ntcyp94b3-2基因通過針對ntcyp94b3-1基因中seqid?no.3所示的靶位點和/或ntcyp94b3-2基因中seq?id?no.4所示的靶位點進行，或通過具有seq?id?no.3和/或seq?id?no.?4所示序列的sgrna進行。
7、根據(jù)本發(fā)明另一個方面的實施方案，提供了一種煙草中ntcyp94b3基因的應用，其中，基因包括ntcyp94b3-1基因和/或ntcyp94b3-2基因，應用包括如下任一項的應用：（1）抵抗蟲害脅迫；（2）提高煙草植物中抗蟲物質(zhì)的含量；（3）用于煙草育種。
8、根據(jù)本發(fā)明的實施方案，抵抗蟲害脅迫包括抗斜紋夜蛾和煙草天蛾?。
9、根據(jù)本發(fā)明另一個方面的實施方案，提供了一種表達載體，其包括靶向ntcyp94b3-1基因中seq?id?no.3所示的靶位點和/或ntcyp94b3-2基因中seq?id?no.4所示的靶位點的多核苷酸，或編碼seq?id?no.3和/或seq?id?no.?4所示序列的sgrna的多核苷酸。
10、根據(jù)本發(fā)明的實施方案，表達載體適用于單子葉植物或雙子葉植物，優(yōu)選地為煙草，優(yōu)選地表達載體為crispr基因編輯載體。
11、根據(jù)本發(fā)明另一個方面的實施方案，提供了一種試劑盒，其包含上述表達載體；任選的，試劑盒還包含編碼cas蛋白如cas9的多核苷酸，任選的編碼sgrna的多核苷酸和編碼cas蛋白的多核苷酸在同一表達載體中或在不同表達載體中。
12、根據(jù)本發(fā)明的實施方案，通過靶向茉莉酸信號途徑的ntcyp94b3-1和ntcyp94b3-2基因，在植物中進行單基因或多基因降低表達或敲除，發(fā)現(xiàn)可大幅增強敲除植株的抗蟲性能尤其是對斜紋夜蛾和煙草天蛾的抗性；同時該基因敲除后對煙草的生長以及烤后煙葉的產(chǎn)量和品質(zhì)都沒有產(chǎn)生影響，在分子育種等方面具有廣闊的應用前景。
1.一種增強煙草植株抗蟲性的方法，其包括降低煙草中ntcyp94b3-1基因和/或ntcyp94b3-2基因的表達水平的步驟。
2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其中，
3.根據(jù)權利要求1或2所述的方法，其中，
4.根據(jù)權利要求1或2所述的方法，其中，
5.根據(jù)權利要求4所述的方法，其中，降低煙草中ntcyp94b3-1基因和/或ntcyp94b3-2基因的表達水平或敲除ntcyp94b3-1基因和/或ntcyp94b3-2基因通過針對ntcyp94b3-1基因中seq?id?no.3所示的靶位點和/或ntcyp94b3-2基因中seq?id?no.4所示的靶位點進行，或通過具有seq?id?no.3和/或seq?id?no.?4所示序列的sgrna進行。
6.煙草中ntcyp94b3基因的應用，其中，所述基因包括ntcyp94b3-1基因和/或ntcyp94b3-2基因，所述應用包括如下任一項所述的應用：
7.根據(jù)權利要求6所述的應用，其中，所述抵抗蟲害脅迫包括抗斜紋夜蛾和煙草天蛾。
8.表達載體，其包括靶向ntcyp94b3-1基因中seq?id?no.3所示的靶位點和/或ntcyp94b3-2基因中seq?id?no.4所示的靶位點的多核苷酸，或編碼seq?id?no.3和/或seqid?no.?4所示序列的sgrna的多核苷酸。
9.根據(jù)權利要求8所述的表達載體，所述表達載體適用于單子葉植物或雙子葉植物，優(yōu)選地為煙草，優(yōu)選地所述表達載體為crispr基因編輯載體。
10.一種試劑盒，其包含權利要求8或9所述的表達載體；任選的，所述試劑盒還包含編碼cas蛋白如cas9的多核苷酸，任選的編碼sgrna的多核苷酸和編碼cas蛋白的多核苷酸在同一表達載體中或在不同表達載體中。