本發(fā)明屬于藥物分析，尤其涉及一種氟雷拉納、賽拉菌素復(fù)方制劑中有關(guān)物質(zhì)的檢測方法。

背景技術(shù)：

1、氟雷拉納主要通過干擾gaba門控氯離子通道發(fā)揮作用，與環(huán)戊二烯類、苯基吡唑類和大環(huán)內(nèi)酯類等殺蟲劑的作用靶標類似。氟雷拉納是一種廣譜性殺蟲劑，對蜱目、蚤目、虱目、半翅目和雙翅目等害蟲均具有良好的殺蟲活性，其毒力高于或與常用殺蟲劑相當。氟雷拉納不僅與現(xiàn)有殺蟲劑無顯著的交互抗性，甚至對部分抗性害蟲也具有較好的殺蟲活性。

2、賽拉菌素是一種半合成的大環(huán)內(nèi)酯，是一種抗寄生蟲劑和驅(qū)蟲劑。能夠激活神經(jīng)元和咽肌中的谷氨酸門控氯離子通道(glutamate-gatedchlchemicalbookoridechannels)，以預(yù)防惡絲蟲，淋巴絲蟲和線蟲感染。還是一種有效p-糖蛋白(p-glycoprotein)底物和抑制劑，ic50為120nm。安全性有很大提高，口服、注射均有良好效果，是一種主要針對寵物貓狗的成年蚤、絲蟲及疥癬的體內(nèi)外殺蟲劑。

3、隨著國內(nèi)對該產(chǎn)品的研究深入，其生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的雜質(zhì)也逐漸被發(fā)現(xiàn)，氟雷拉納和賽拉菌素相關(guān)工藝雜質(zhì)、降解雜質(zhì)，都會影響到產(chǎn)品質(zhì)量，為了保證氟雷拉納賽拉菌素復(fù)方制劑后續(xù)的研發(fā)和生產(chǎn)質(zhì)量，需要對氟雷拉納賽拉菌素復(fù)方制劑的質(zhì)量進行控制。由此提供一種氟雷拉納賽拉菌素復(fù)方制劑中有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，有助于控制氟雷拉納賽拉菌素復(fù)方制劑的產(chǎn)品質(zhì)量。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，提供一種氟雷拉納、賽拉菌素復(fù)方制劑中有關(guān)物質(zhì)的檢測方法。以磷酸溶液為流動相a，以乙腈-甲醇的混合液為流動相b，并通過改變流動相的比例，應(yīng)用梯度洗脫的方式，對氟雷拉納、賽拉菌素復(fù)方制劑進行有關(guān)物質(zhì)檢測。

2、本發(fā)明技術(shù)方案如下：

3、一種氟雷拉納、賽拉菌素復(fù)方制劑中有關(guān)物質(zhì)的檢測方法，所述復(fù)方制劑中包含氟雷拉納和賽拉菌素。

4、所述氟雷拉納與賽拉菌素復(fù)方制劑中的有關(guān)物質(zhì)為雜質(zhì)a、雜質(zhì)b、雜質(zhì)c、雜質(zhì)d、雜質(zhì)e、雜質(zhì)f、雜質(zhì)g中的一種或幾種，其結(jié)構(gòu)如下表1：

5、表1雜質(zhì)結(jié)構(gòu)

6、

7、所述氟雷拉納、賽拉菌素復(fù)方制劑中有關(guān)物質(zhì)檢測的具體步驟如下：

8、(1)配制空白溶液、空白輔料溶液、混合對照品溶液；

9、(2)配制供試品溶液；

10、(3)將供試品溶液、混合對照品溶液、空白輔料溶液，分別注入超高效液相色譜儀，記錄色譜圖。

11、所述超高效液相色譜的條件為：

12、進樣量：1～30μl；

13、色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠柱(c18色譜柱)；規(guī)格2.1×150mm；

14、流速：0.2～1.5ml/min；

15、柱溫：20～60℃；

16、檢測波長：210～280nm；

17、流動相a為0.01～0.2％磷酸溶液(取磷酸0.1～2ml，加水溶解并稀釋至1000ml)；

18、流動相b為乙腈-甲醇，乙腈:甲醇＝(10～50):(90～50)；

19、步驟(3)中所述色譜條件檢測所得的混合對照品溶液色譜圖中，雜質(zhì)a、b、c、d、e、f、g色譜峰之間的分離度應(yīng)大于1.5。

20、所述梯度洗脫條件為表2所示：

21、表2梯度洗脫條件

22、 時間(分鐘) 流動相a(％) 流動相b(％) 0 30～50 50～70 35 0～20 80～100 43 0～20 80～100 43.1 30～50 50～70 50 30～50 50～70

23、。

24、優(yōu)選地，所述流速為0.45ml/min。

25、優(yōu)選地，所述柱溫為45℃。

26、優(yōu)選地，所述檢測波長為243nm。

27、優(yōu)選地，所述色譜柱為zorbax?eclipse?xdb-c18(2.1mm×150mm，1.8μm)。

28、優(yōu)選地，所述流動相a中磷酸溶液濃度為0.1％。

29、優(yōu)選地，所述流動相b中乙腈、甲醇的用量比為(10～40):(90～60)，更優(yōu)選為25:75。

30、優(yōu)選地，所述梯度洗脫條件為表3所示：

31、表3梯度洗脫條件

32、 時間(分鐘) 流動相a(％) 流動相b(％) 0 40 60 35 10 90 43 10 90 43.1 40 60 50 40 60

33、。

34、所述氟雷拉納、賽拉菌素復(fù)方制劑中有關(guān)物質(zhì)的檢測方法在含氟雷拉納、賽拉菌素的復(fù)方制劑的質(zhì)量控制中的應(yīng)用。

35、所述氟雷拉納、賽拉菌素復(fù)方制劑包括但不限于溶液劑、澆潑劑、滴劑、片劑、混懸劑、顆粒劑、膠囊劑。

36、優(yōu)選地，所述氟雷拉納、賽拉菌素復(fù)方制劑為滴劑。

37、本發(fā)明利用超高效液相色譜法對氟雷拉納、賽拉菌素復(fù)方制劑中有關(guān)物質(zhì)進行分析檢測，有益效果如下：

38、1.該色譜條件可同時檢測氟雷拉納與賽拉菌素的有關(guān)物質(zhì)，各成分產(chǎn)生的雜質(zhì)均可以良好分離。

39、2.雜質(zhì)b、雜質(zhì)c與雜質(zhì)d，雜質(zhì)f與雜質(zhì)g極性差異較小，在色譜柱上出峰時間接近，不易分離。本發(fā)明的流動相梯度、流速和柱溫可以增大各雜質(zhì)在色譜柱上保留能力的差異性，從而使雜質(zhì)c、雜質(zhì)b與雜質(zhì)d相互之間及雜質(zhì)f與雜質(zhì)g相互之間達到有效分離，提高定量檢測準確性。

40、3.儀器使用超高效液相色譜儀(uplc)，可以減少運行時間，提高雜質(zhì)間分離效果。

41、4.選擇zorbax?eclipse?xdb-c18(2.1mm×150mm，1.8μm)色譜柱，該粒徑色譜柱分離效果較強，對樣品各成分分離度好，色譜柱穩(wěn)定性好。

42、5.選擇243nm作為檢測波長，可以同時兼顧吸收波長相差較大的氟雷拉納和賽拉菌素及其雜質(zhì)，各組分檢測限和定量限均達到要求。在該波長下各雜質(zhì)組分靈敏度高，均可以準確定量。

43、6.通過方法學(xué)驗證，檢測方法準確可行：該檢測方法簡便可靠，靈敏度高，專屬性、精密度、重復(fù)性均良好。