本發(fā)明涉及免疫層析，特別涉及基于免疫層析法的新型冠狀病毒抗原檢測試劑盒。
背景技術(shù)：
1、新型冠狀病毒(以下簡稱新冠病毒，sars-cov-2)為β屬冠狀病毒，有包膜，顆粒呈圓形或橢圓形，直徑60～140nm，covid-19是一種由病毒引起的疾病。最常見的癥狀是發(fā)燒、發(fā)冷和喉嚨痛，但也有一系列其他癥狀。世界衛(wèi)生組織(who)提出的“關(guān)切的變異株”(variantof?concern,voc)有5個，分別為阿爾法(alpha，b.1.1.7)、貝塔(beta，b.1.351)、伽瑪(gamma，p.1)、德爾塔(delta，b.1.617.2)和奧密克戎(omicron，b.1.1.529)。
2、為進一步優(yōu)化sars-cov-2檢測策略，根據(jù)疫情防控需要，國內(nèi)推進“抗原篩查、核酸診斷”的監(jiān)測模式，在核酸檢測基礎上增加抗原檢測作為補充，以提高sars-cov-2感染者“早發(fā)現(xiàn)”的能力。全球范圍內(nèi)，sars-cov-2抗原快速檢測已獲得廣泛認可，截至2022年4月7日，我國國家藥品監(jiān)督管理局(nmpa)已批準多款抗原快速檢測試劑，抗原檢測敏感性與感染者病毒載量呈正相關(guān)，對于傳染性強的高病毒載量樣本，檢測的敏感性更高，常見樣本的sars-cov-2抗原檢測敏感性由高至低分別為鼻腔拭子(83％)、鼻咽拭子(71％)、口咽拭子(69％)和唾液(68％)。
3、根據(jù)檢測試劑所使用的標記物，可分為膠體金免疫層析法、乳膠免疫層析法和熒光免疫層析法。目前已上市的試劑盒適用于鼻腔拭子、鼻咽拭子、口咽拭子和唾液，樣本需要進行預處理，而且需要進行加樣操作。
技術(shù)實現(xiàn)思路
1、為了解決上述問題，本發(fā)明提供一種基于免疫層析法的新型冠狀病毒抗原檢測試劑盒，所述試劑盒是包括檢測試劑條、樣本收集墊和塑料卡殼的檢測試劑卡，所述檢測試劑條是將包被nc膜、結(jié)合墊、樣本墊、吸水紙依次粘貼到pvc背板上制備得到，所述試劑盒可以對鼻咽拭、咽拭子、鼻拭子、唾液樣本中的新型冠狀病毒的n蛋白抗原檢測的試劑盒，所述檢測試劑卡的樣本墊用50～200mm、ph9.0?tris-hcl、1.5～4％?nacl、0.2％～0.4％?sds、3～5％?bsa、0.2～1％tween-20預處理；和采用乳膠微球進行新型冠狀病毒抗體的標記。
2、在一種實施方式中，采用乳膠微球標記新型冠狀病毒抗體的活化緩沖液為25-100mm?mes緩沖液，偶聯(lián)緩沖液為25-100mm的hepes緩沖液，蛋白量為50μg～100μg/mg微球。
3、在一種實施方式中，采用乳膠微球標記新型冠狀病毒抗體的活化緩沖液為50mmmes緩沖液，偶聯(lián)緩沖液為50mm的hepes緩沖液，蛋白量為50μg/mg微球。
4、在一種實施方式中，用25mm?mes緩沖液進行乳膠微球活化20分鐘，離心棄上清；加入相等體積的25mm?hepes緩沖液清洗，離心棄上清；加入原體積1/2體積的25mm?hepes緩沖液，按照50μg～100μg/mg微球比例加入新型冠狀病毒抗體，反應2小時；加入1/5體積的封閉液進行封閉1小時，離心棄上清；加入原體積1/4體積的復溶液重懸微球，得到乳膠微球標記復合物。
5、在一種實施方式中，標記乳膠微球的抗體復合物按照1-3ul/cm的乳膠微球標記復合物噴涂于玻璃纖維上，37℃干燥16～18小時，得到微球標記結(jié)合墊。
6、現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點：
7、1)適用樣本類型較多，可以適用于鼻咽拭、咽拭子、鼻拭子、唾液樣本類型，滿足不同檢測需求，對比兒童等不易采集鼻、咽拭子樣本時，可以收集口中唾液樣本直接進行測定。本發(fā)明是基于免疫層析法和乳膠微球標記工藝相結(jié)合，實現(xiàn)對鼻咽拭、咽拭子、鼻拭子、唾液樣本中的新型冠狀病毒的n蛋白抗原進行檢測，可用于新型冠狀病毒的診斷、疑似人員自我篩查和自我檢測等應用。
8、2)操作簡便，對唾液樣本無需進行預處理，直接可以進行檢測，降低預處理后的靈敏度低的確定。
9、3)靈敏度高，通過乳膠微球標記、預處理的樣本墊、大樣本體積方面，提高檢測靈敏度；采用乳膠微球進行抗體標記，乳膠微球檢測靈敏度高于膠體金2～4倍。
10、4)成本較低。所需原材料、技術(shù)和儀器均較簡單，易獲得。
1.基于免疫層析法的新型冠狀病毒抗原檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒是包括檢測試劑條、樣本收集墊和塑料卡殼的檢測試劑卡，所述檢測試劑條是將包被nc膜、結(jié)合墊、樣本墊、吸水紙依次粘貼到pvc背板上制備得到，所述試劑盒可以對鼻咽拭、咽拭子、鼻拭子、唾液樣本中的新型冠狀病毒的n蛋白抗原檢測的試劑盒，所述檢測試劑卡的樣本墊用50～200mm、ph9.0?tris-hcl、1.5～4％nacl、0.2％～0.4％sds、3～5％bsa、0.2～1％tween-20預處理；和采用乳膠微球進行新型冠狀病毒抗體的標記。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，采用乳膠微球標記新型冠狀病毒抗體的活化緩沖液為25-100mm?mes緩沖液，偶聯(lián)緩沖液為25-100mm的hepes緩沖液，蛋白量為50μg～100μg/mg微球。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的試劑盒，其特征在于，采用乳膠微球標記新型冠狀病毒抗體的活化緩沖液為50mm?mes緩沖液，偶聯(lián)緩沖液為50mm的hepes緩沖液，蛋白量為50μg/mg微球。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，用25mm?mes緩沖液進行乳膠微球活化20分鐘，離心棄上清；加入相等體積的25mm?hepes緩沖液清洗，離心棄上清；加入原體積1/2體積的25mm?hepes緩沖液，按照50μg～100μg/mg微球比例加入新型冠狀病毒抗體，反應2小時；加入1/5體積的封閉液進行封閉1小時，離心棄上清；加入原體積1/4體積的復溶液重懸微球，得到乳膠微球標記復合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的試劑盒，其特征在于，標記乳膠微球的抗體復合物按照1-3ul/cm的乳膠微球標記復合物噴涂于玻璃纖維上，37℃干燥16～18小時，得到微球標記結(jié)合墊。