本發(fā)明涉及一種復(fù)合物，其包含具有天然存在的α-乳清蛋白序列的多肽或其功能變體；或包含所述多肽的α螺旋結(jié)構(gòu)域的多達50個氨基酸的肽；以及脂肪酸或脂質(zhì)或其鹽，所述復(fù)合物用于治療腫瘤監(jiān)測、預(yù)防或治療癌癥和其它病癥，包括代謝相關(guān)病癥，無論是繼發(fā)于癌癥還是獨立于癌癥。

背景技術(shù)：

1、hamlet(對腫瘤細(xì)胞致命的人α-乳清蛋白)是殺腫瘤未折疊蛋白-脂質(zhì)復(fù)合物家族的第一個成員，由部分未折疊的α-乳清蛋白和油酸組成。最初以在高鹽條件下將含酪蛋白的人乳級分通過離子交換柱獲得的級分形式分離(wo96/004929)，發(fā)現(xiàn)其具有生物活性，特別是具有抗菌活性。隨后，已經(jīng)衍生出制備活性復(fù)合物的其它方法，包括將各種來源的α-乳清蛋白和油酸在溶液中一起加熱的方法。然而，除此之外，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)源自牛α-乳清蛋白的hamlet和相關(guān)復(fù)合物，如bamlet，可以殺死轉(zhuǎn)化的細(xì)胞，如腫瘤細(xì)胞或乳頭狀瘤細(xì)胞，并且具有抗病毒活性。如人類膠質(zhì)母細(xì)胞瘤異種移植物和膀胱癌癥的動物模型所示，hamlet在體外殺死多種類型的腫瘤細(xì)胞，這種抑瘤活性在體內(nèi)保持。局部應(yīng)用hamlet去除或減少皮膚乳頭狀瘤和局部滴注hamlet可殺死膀胱癌細(xì)胞，但不能殺死周圍組織中的健康細(xì)胞，并導(dǎo)致腫瘤尺寸減小。腫瘤細(xì)胞對hamlet的敏感性反映了致癌轉(zhuǎn)化，并受到細(xì)胞糖酵解狀態(tài)的影響(stormp,etal.(2011).oncoaene)。c-myc或ras通路成員的shrna沉默賦予了對hamlet的抗性，c-myc表達水平與hamlet敏感性平行。此外，葡萄糖剝奪使腫瘤細(xì)胞對hamlet敏感，并且hamlet敏感性被靶向糖酵解酶的shrna修飾。此外，hamlet已被證明對整體代謝有明顯影響，腫瘤細(xì)胞代謝迅速癱瘓，糖酵解通量可能轉(zhuǎn)向戊糖磷酸途徑。

2、腫瘤監(jiān)測對于防止腫瘤細(xì)胞發(fā)展成腫瘤塊至關(guān)重要。然而，人們對清除新興腫瘤細(xì)胞或?qū)ζ溥M行再程序化以促進健康的保護力知之甚少。期望組織環(huán)境中含有執(zhí)行抗腫瘤防御的分子，但對免疫監(jiān)測的作用甚至還不清楚，因為免疫缺陷本身似乎不會導(dǎo)致癌癥。新生兒的組織發(fā)育也面臨著類似的挑戰(zhàn)，因為未成熟細(xì)胞或病毒感染的細(xì)胞需要被清除，并被在成熟組織中進行基本生理功能的細(xì)胞所取代。牛奶中提供的分子已經(jīng)演化為在呼吸道和胃腸道局部提供溶液。因此，牛奶中提供的去除未成熟細(xì)胞并驅(qū)動組織分化的分子溶液可能與實現(xiàn)腫瘤治療監(jiān)測高度相關(guān)。

3、α-乳清蛋白是人乳中含量最豐富的蛋白質(zhì)，對后代的生存至關(guān)重要。天然α-乳清蛋白在乳糖合酶復(fù)合物中作為底物特異性分子發(fā)揮作用，沒有乳糖時，乳汁由于粘度高無法排出。當(dāng)部分解折疊時，人α-乳清蛋白通過形成油酸復(fù)合物獲得殺死腫瘤細(xì)胞和未成熟細(xì)胞的能力。hamlet(對腫瘤細(xì)胞致命的人α-乳清蛋白)有效殺死多種腫瘤細(xì)胞，并在結(jié)腸癌和其他幾種癌癥模型和臨床研究中顯示出治療效果。第二個hamlet家族成員，α1-油酸鹽，由α-乳清蛋白的n-末端α-螺旋肽形成，已顯示出對膀胱癌患者的治療效果。

4、雖然先前已經(jīng)證明諸如hamlet的復(fù)合物在一系列先前存在的癌癥治療中(wo2005/082406)，以及用于預(yù)防性治療結(jié)腸癌(wo2014/023976)是治療性的，但是先前還沒有證實這種復(fù)合物可用于治療所述復(fù)合物不能直接應(yīng)用的癌癥(例如胃腸道外癌癥的口服應(yīng)用)。令人驚訝的是，發(fā)明人現(xiàn)在已經(jīng)證明，這些復(fù)合物可用于治療遠離施用部位的癌癥以及繼發(fā)性癌癥或轉(zhuǎn)移癌。復(fù)合物的性質(zhì)使得人們不會期望它從施用部位被拿走。因此，該復(fù)合物在遠離其原始施用的部位發(fā)揮作用的能力是非常令人驚訝的。此外，本發(fā)明人已經(jīng)證明，這些復(fù)合物具有長期作用，持續(xù)時間超過施用期，使本發(fā)明人能夠確定這些復(fù)合物在預(yù)防或治療繼發(fā)性或新發(fā)癌癥方面的有效性，這也是顯著和令人驚訝的。

5、本發(fā)明人研究了牛α-乳清蛋白復(fù)合物bamlet如何影響腸道腫瘤發(fā)展和組織穩(wěn)態(tài)，將易患腸癌-腸腺瘤性息肉病-多發(fā)性腸腫瘤(apcmin/+)小鼠與c57bl/6對照進行了比較。結(jié)果表明，在飲用水中添加bamlet足以延緩腫瘤的發(fā)展并提高易患腫瘤小鼠的存活率。深入分析揭示了影響腫瘤微環(huán)境的轉(zhuǎn)錄機制的深刻影響。這些效應(yīng)包括被抑制的程序性細(xì)胞死亡-1(pd-1)信號通路。還觀察到對肺、肝、腎中wnt/β-連環(huán)蛋白信號傳導(dǎo)的意外影響，表明bamlet在腸外具有保護作用。相比之下，健康的小鼠表現(xiàn)出較弱的腸道反應(yīng)，影響脂質(zhì)和葡萄糖代謝以及胰島素抵抗等代謝功能，沒有證據(jù)表明有全身性影響。結(jié)果表明，在易感宿主中，牛奶成分優(yōu)先靶向腫瘤細(xì)胞，在健康宿主背景下不會產(chǎn)生有害影響，從而滿足了腫瘤監(jiān)測的需求。腸外組織對bamlet的反應(yīng)進一步表明，α-乳清蛋白在新生兒組織發(fā)育和腫瘤監(jiān)測中起著更普遍的作用。

6、根據(jù)收集到的證據(jù)，很明顯，這些復(fù)合物具有全身性影響，改變了整體腫瘤環(huán)境。如下所述，發(fā)明人已經(jīng)提供了響應(yīng)于復(fù)合物施用的基因表達變化和生理影響的證據(jù)。此外，盡管大多數(shù)癌癥療法是針對單一攻擊點，例如通過靶向一種特定基因，但本發(fā)明的復(fù)合物具有顯著廣泛的功效，通過多種途徑治療癌癥。這使得這些復(fù)合物可用于靶向許多不同的癌癥，包括轉(zhuǎn)移癌。

7、發(fā)明人還發(fā)現(xiàn)，施用復(fù)合物可以提供對癌癥的長期保護。

8、發(fā)明人進一步確定了其他全身效果，特別是代謝效果。在其他健康的動物身上也發(fā)現(xiàn)了這種效果。由于對健康有重大影響的癌癥繼發(fā)疾病減少了，這些效果可能會影響癌癥的發(fā)展和/或癌癥患者的總體進展。這些效果也證明了復(fù)合物在治療與癌癥無關(guān)的疾病時的有效性。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明提供了一種用于各種治療應(yīng)用的復(fù)合物，以及使用該復(fù)合物或包含該復(fù)合物的藥物組合物進行治療的方法。所述復(fù)合物特別適用于治療惡性轉(zhuǎn)化，特別是癌癥，特別是在遠離復(fù)合物施用部位的部位發(fā)現(xiàn)這種轉(zhuǎn)化的情況下。

2、所述復(fù)合物包含具有天然存在的α-乳清蛋白序列的多肽或其功能變體；或包含所述多肽的α-螺旋結(jié)構(gòu)域的多達50個氨基酸的肽；和脂肪酸或脂質(zhì)或其鹽。

3、本發(fā)明提供了一種用于腫瘤監(jiān)測的復(fù)合物。進一步提供了一種如所定義的用于改變腫瘤環(huán)境的復(fù)合物。本發(fā)明還提供了一種治療或預(yù)防癌癥的方法，包括腫瘤監(jiān)測步驟和/或改變腫瘤環(huán)境的步驟。

4、腫瘤監(jiān)測是指對癌細(xì)胞或癌前細(xì)胞，或癌癥或癌前狀態(tài)的其他指標(biāo)進行識別。其還可能包括對此類細(xì)胞或指標(biāo)的存在產(chǎn)生反應(yīng)，例如通過改變腫瘤環(huán)境。

5、改變腫瘤環(huán)境意味著改變影響腫瘤發(fā)展或進展的條件，例如但不限于免疫細(xì)胞、信號分子、細(xì)胞外基質(zhì)、血液供應(yīng)。其可以指腫瘤微環(huán)境，即腫瘤周圍的環(huán)境，也可以指更廣泛的身體環(huán)境。特別是，改變腫瘤環(huán)境意味著改變腫瘤環(huán)境，以減少或預(yù)防腫瘤的發(fā)展、進展或轉(zhuǎn)移，或減少或預(yù)防其發(fā)生的可能性。

6、本發(fā)明提供了用于預(yù)防或治療，特別是治療癌癥的復(fù)合物；其中所述所述復(fù)合物用于在第一部位施用，并且所述癌癥在第二部位。

7、本發(fā)明還提供了預(yù)防或治療癌癥，特別是治療癌癥的方法，包括向受試者施用有效量的復(fù)合物或包含所述復(fù)合物的藥物組合物的步驟，所述受試者患有癌癥或具有癌癥發(fā)展傾向或癌癥發(fā)展可能性增加，其中所述復(fù)合物或組合物用于在第一部位施用，并且所述癌癥在第二部位。

8、所述復(fù)合物或包含所述復(fù)合物的組合物用于施用于身體上或體內(nèi)的第一部位。此處，本發(fā)明的意思是所述復(fù)合物被配制用于施用于特定部位，例如其被配制用于口服、膀胱內(nèi)、腦內(nèi)或局部施用。

9、癌癥是在第二個部位發(fā)現(xiàn)的。例如，在鼻道、胃腸道(例如，在一種或多種口腔、胃、結(jié)腸、腸)、腦、肺、腎、陰道、膀胱、肝、皮膚、乳腺、前列腺和/或卵巢的一種或多種中發(fā)現(xiàn)癌癥。

10、特別地，可以在肺、腎或肝中發(fā)現(xiàn)癌癥。優(yōu)選在肺中發(fā)現(xiàn)?；蛘?，可能在腎臟中發(fā)現(xiàn)?；蛘?，可能在肝臟中發(fā)現(xiàn)。

11、在一些實施方案中，第二部位不是鼻腔、胃腸道(在口腔、胃、結(jié)腸、腸中的一個或多個)、腦、肺、腎、陰道、膀胱、肝、皮膚、乳腺、前列腺和/或卵巢中的一種或多種。特別地，在一些實施方案中，所述第二部位不是鼻腔通道。在一些實施方案中，所述第二部位不是胃腸道。在一些實施方案中，所述第二部位不是大腦。在一些實施方案中，所述第二部位不是肺。在一些實施方案中，所述第二部位不是腎臟。在一些實施方案中，所述第二部位不是陰道。在一些實施方案中，所述第二部位不是膀胱。在某些實施方案中，所述第二部位不是肝臟。在一些實施方案中，所述第二部位不是皮膚。在一些實施方案中，所述第二部位不是乳房。在一些實施方案中，所述第二部位不是前列腺。在一些實施方案中，所述第二部位不是卵巢。

12、第一部位和第二部位優(yōu)選不同，更優(yōu)選地彼此遠離，即位于身體的不同部位或不同系統(tǒng)中。例如，在復(fù)合物用于口服施用的情況下，癌癥不是胃腸道的癌癥。

13、表1提供了第一部位和第二部位的進一步示例。

14、

15、表1施用途徑和要治療的癌癥

16、癌癥的治療或預(yù)防可以包括腫瘤檢測和/或改變腫瘤環(huán)境的步驟。

17、本發(fā)明還提供了一種如前所述的復(fù)合物，用作檢查點抑制劑，特別是pd-1抑制劑。本發(fā)明提供了用于預(yù)防或治療特別是治療pd-l1陽性癌癥或其他易受pd-1靶向的癌癥的復(fù)合物。

18、本發(fā)明還提供了一種預(yù)防或治療pd-l1陽性或易受pd-1靶向影響的癌癥的方法，包括向有需要的受試者施用有效治療量的復(fù)合物或包含復(fù)合物的組合物。

19、可以在身體的任何部位發(fā)現(xiàn)癌癥，例如在與本發(fā)明的其它方面相關(guān)的列出的任何部位。

20、所述復(fù)合物可以通過任何合適的途徑施用，例如與本發(fā)明其他方面相關(guān)的那些途徑。所述復(fù)合物可以直接施用到癌癥的部位，也可以在不同的部位施用。例如，所述復(fù)合物可以口服施用，用于治療胃腸道或身體其他部位(如肝臟、肺或腎臟)的pd-l1陽性癌癥。

21、癌癥可能是原發(fā)性癌癥或轉(zhuǎn)移癌。

22、本發(fā)明還提供了一種如前所述的用于預(yù)防、減少或治療轉(zhuǎn)移癌的復(fù)合物。

23、本發(fā)明還提供了一種預(yù)防或治療轉(zhuǎn)移性癌癥的方法，包括向有需要的受試者施用有效治療量的復(fù)合物或包含復(fù)合物的組合物。

24、發(fā)生轉(zhuǎn)移的原發(fā)性腫瘤或轉(zhuǎn)移本身可以在身體的任何部位發(fā)現(xiàn)，例如在與本發(fā)明其他方面相關(guān)的任何部位。

25、所述復(fù)合物可以通過任何合適的途徑施用，例如與本發(fā)明其他方面相關(guān)的那些途徑。其可以直接施用于原發(fā)性癌癥或轉(zhuǎn)移部位，或在不同部位施用。例如，該復(fù)合物可用于口服施用，以預(yù)防、減少或治療胃腸道癌癥或由胃腸道癌癥引起的轉(zhuǎn)移性癌癥。或者，其可能用于預(yù)防、減少或治療轉(zhuǎn)移性癌癥，或由身體其他部位(如肝臟、肺或腎臟)的癌癥引起的癌癥。

26、預(yù)防、減少或治療轉(zhuǎn)移癌可能包括腫瘤監(jiān)測和/或改變腫瘤環(huán)境的步驟。

27、本發(fā)明還提供了一種如前所述的復(fù)合物，用于治療或預(yù)防代謝相關(guān)疾病，如胰島素抵抗、ii型糖尿病、代謝綜合征、非酒精性脂肪酸肝病、肝硬化、高血壓。所述復(fù)合物可用于調(diào)節(jié)胰島素耐受性或敏感性、脂質(zhì)代謝和/或葡萄糖代謝，因此可用于治療由此類過程挑戰(zhàn)引起的疾病。

28、本發(fā)明還提供了一種治療這種代謝相關(guān)疾病的方法，包括向受試者施用如所定義的復(fù)合物。

29、這種代謝狀況可能與癌癥的存在有關(guān)，例如它們可能繼發(fā)于癌癥，或者可能與其無關(guān)。所述復(fù)合體通過治療癌癥或治療癌癥繼發(fā)性疾病，或兩者以改善患有癌癥的受試者的健康特別有效。因此，本發(fā)明提供了如上所述的復(fù)合物，用于治療或預(yù)防患有或曾經(jīng)患有癌癥的受試者的代謝相關(guān)病癥，例如胰島素抵抗、ii型糖尿病、代謝綜合征、非酒精性脂肪酸肝病、肝硬化、高血壓。還提供了如前所述的復(fù)合物，用于治療或預(yù)防未患有或從未患有癌癥的受試者的代謝相關(guān)病癥，例如胰島素抵抗、ii型糖尿病、代謝綜合征、非酒精性脂肪酸肝病、肝硬化、高血壓。

30、復(fù)合物

31、所述復(fù)合物包含具有天然存在的α-乳清蛋白序列的多肽或其功能變體；或包含所述多肽的α-螺旋結(jié)構(gòu)域的多達50個氨基酸的肽；和脂肪酸或脂質(zhì)或其鹽。

32、在一個實施方案中，多肽具有天然存在的α-乳清蛋白的序列，優(yōu)選人或牛α-乳清蛋白，更優(yōu)選牛α-乳清蛋白。

33、在一個實施方案中，α螺旋結(jié)構(gòu)域是人α-乳清蛋白的α1(殘基1-39)或α2(殘基81-123)結(jié)構(gòu)域，是seq?id?no?3或seq?id?no?4；kqftk?xelsqllkdidgyggialpelixtmfhtsgydtq(seq?id?no?3)

34、lddditddim?xakkildikgidywlahkalxtekleqwl?xekl(seq?id?no?4)，其中x是半胱氨酸以外的氨基酸殘基。

35、在一個實施方案中，所述復(fù)合物包含約45、42或40個氨基酸，特別是39個氨基酸的肽，優(yōu)選對應(yīng)于人α-乳清蛋白的α1結(jié)構(gòu)域。

36、在一個實施方案中，功能變體由缺少二硫鍵的序列組成。在一個實施方案中，功能變體由天然α-乳清蛋白中的半胱氨酸殘基變?yōu)槠渌被釟埢瑑?yōu)選丙氨酸殘基的序列組成。

37、在一個實施方案中，脂肪酸或脂質(zhì)或其鹽是脂肪酸或其鹽。在一個實施方案中，脂肪酸或其鹽是油酸或油酸鹽。

38、在一個實施方案中，多肽具有牛α-乳清蛋白的序列，脂肪酸或其鹽是油酸或油酸鹽。

39、復(fù)合物中存在的多肽可以具有如上所述的α-乳清蛋白或其變體的序列。

40、所述復(fù)合物可稱為生物活性復(fù)合物。如本文所使用的，術(shù)語“生物活性”是指該復(fù)合物具有不同于或強于單個組分的生物活性。特別是，所述復(fù)合物能夠特別選擇性地誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞中的細(xì)胞死亡和/或具有天然蛋白質(zhì)(包括例如單體α-乳清蛋白形式)所沒有的殺菌或抗病毒作用，盡管可能有其他治療作用。

41、術(shù)語“變體”是指具有相似生物功能的蛋白質(zhì)或多肽，但其中的氨基酸序列不同于其衍生的堿基序列，因為序列中的一個或多個氨基酸被其他氨基酸取代。氨基酸取代可被視為“保守”的，即其中一個氨基酸被具有廣泛相似性質(zhì)的不同氨基酸取代。非保守取代是指氨基酸被不同類型的氨基酸取代。

42、“保守取代”是指一種氨基酸被同一類別的另一種氨基酸取代，其中類別定義如下：

43、 類別 氨基酸示例 非極性： a、v、l、i、p、m、f、w 不帶電極性 g、s、t、c、y、n、q 類別 氨基酸示例 酸性： d、e 堿性： k、r、h.

44、如本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的，通過保守取代來改變肽的一級結(jié)構(gòu)可能不會顯著改變所述肽的活性，因為插入序列的氨基酸的側(cè)鏈可能能夠形成與被取代的氨基酸側(cè)鏈類似的鍵和接觸。即使在取代位于決定肽構(gòu)象的關(guān)鍵區(qū)域時也是如此。

45、只要這些取代不中斷dna結(jié)合結(jié)構(gòu)域多肽的功能，非保守取代也是可能的。從廣義上講，在不改變多肽生物活性的情況下，更少的非保守取代是可能的。

46、確定任何取代(以及實際上任何氨基酸缺失或插入)的效果完全在本領(lǐng)域技術(shù)人員的常規(guī)能力范圍內(nèi)，本領(lǐng)域技術(shù)員可以很容易地確定變體多肽是否保留了堿性蛋白質(zhì)的基本性質(zhì)和活性。例如，當(dāng)確定多肽的變體是否落入本發(fā)明的范圍內(nèi)時，本領(lǐng)域技術(shù)人員將確定包含所述變體的復(fù)合物是否保留了與天然蛋白質(zhì)的未折疊形式形成的復(fù)合物的生物活性(例如腫瘤細(xì)胞死亡)，并且該多肽具有至少60％，優(yōu)選至少70％，更優(yōu)選至少80％，還更優(yōu)選90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％的天然蛋白質(zhì)。

47、多肽的變體可以包含或基本上由與天然蛋白質(zhì)序列如α-乳清蛋白或溶菌酶序列具有至少70％同一性，例如至少75％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列組成。

48、使用blastp計算機程序，以天然蛋白質(zhì)序列作為堿基序列，適當(dāng)?shù)卮_定序列同一性水平。這意味著天然蛋白質(zhì)序列形成了確定同一性百分比的序列。blast軟件可在以下網(wǎng)址公開獲取http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/blast.cgi(2009年3月12日可訪問)。

49、在一個特定的實施方案中，多肽是α-乳清蛋白，如人、?；蚓d羊的α-乳清蛋白。雖然如上所述的這些變體可用于本發(fā)明，特別是用于營養(yǎng)保健品，但優(yōu)選利用產(chǎn)品中的天然蛋白質(zhì)。一個特定的實施方案使用人α-乳清蛋白。在另一個實施方案中，α-乳清蛋白是牛α-乳清蛋白。文獻中已知多種α-乳清蛋白的序列，例如watanabe等人,j.vetmedsci,(2000)62(11)；1217-1219。

50、在另一個實施方案中，多肽包含具有α-乳清蛋白序列或其片段但缺乏分子內(nèi)二硫鍵或交聯(lián)的重組蛋白。通過確保重組蛋白缺乏分子內(nèi)二硫鍵交聯(lián)，該分子將是三維非天然的，并且在其原始內(nèi)源性生物活性方面完全失活。這是通過將天然a-乳清蛋白中的半胱氨酸殘基改變?yōu)槠渌麣埢?，特別是丙氨酸殘基來實現(xiàn)的。優(yōu)選地，所有半胱氨酸殘基將被改變?yōu)槠渌麣埢绫彼釟埢?。特別地，重組蛋白基于人α-乳清蛋白的序列，但來自其他來源的α-乳清蛋白，包括?；蚓d羊α-乳清蛋白可用于衍生重組蛋白。

51、在一個特定的實施方案中，多肽是具有天然成熟α-乳清蛋白序列的重組蛋白，但其具有成熟人α-乳清蛋白全長序列中6、28、61、73、77、91、111和120位發(fā)現(xiàn)的所有半胱氨酸，突變?yōu)槠渌被?，如丙氨酸，不會產(chǎn)生二硫鍵。因此，根據(jù)本發(fā)明可以使用的蛋白質(zhì)的一種特定的包括seq?id?no?1的蛋白質(zhì)。

52、

53、其中粗體表示天然人α-乳清蛋白中半胱氨酸突變的位置。

54、如wo2010079362中所報道的，如果方便，例如出于表達目的，可以在蛋白質(zhì)的n和/或c末端連接額外的氨基酸殘基，例如多達20個氨基酸。因此，特別地，在本發(fā)明的復(fù)合物中使用了seq?id?no?1所示的重組蛋白，但在n末端有額外的甲硫氨酸(下文所示的seq?id?no2)。

55、

56、復(fù)合物中使用的多肽適當(dāng)?shù)貫榧兊男问?，并且適當(dāng)?shù)厥褂贸Ｒ?guī)肽合成方法或通過重組表達制備。特別是，編碼所需重組α-乳清蛋白的dna可以插入合適的表達載體，如質(zhì)粒，然后可以使用常規(guī)方法轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，例如原核細(xì)胞如大腸桿菌或真核細(xì)胞如特定昆蟲細(xì)胞。

57、合適的脂肪酸或脂質(zhì)包括已知提供生物活性復(fù)合物的脂肪酸或脂質(zhì)。這些包括脂肪酸，例如如wo2008058547中所述。所述鹽是適當(dāng)?shù)乃苄喳}。合適的鹽的具體示例可以包括堿金屬鹽或堿土金屬鹽。在一個特定的實施方案中，所述鹽是堿金屬鹽，如鈉鹽或鉀鹽。當(dāng)用于制藥時，這些鹽在藥學(xué)上是可接受的。

58、本發(fā)明中使用的脂肪酸或脂質(zhì)的具體示例是具有4-30個，例如6-28個，例如8-26個碳原子的脂肪酸或脂質(zhì)。在特定實施方案中，脂肪酸或脂質(zhì)具有10-24個，例如12-22個，例如14-20個碳原子。特別地，脂肪酸或脂質(zhì)將具有16、17、18或20個碳原子。脂肪酸可以是飽和的或不飽和的。

59、然而，特別地，本發(fā)明的復(fù)合物利用具有18個碳原子的脂肪酸或脂肪酸鹽。在一個實施方案中，本發(fā)明的復(fù)合物利用具有18個碳原子的脂肪酸或脂肪酸鹽，其中脂肪酸鏈?zhǔn)遣伙柡偷?。在一個實施方案中，脂肪酸或脂肪酸鹽是c18:1脂肪酸或其鹽。一個具體的示例是下式的c18:1脂肪酸或其鹽ch3(ch2)7ch＝ch(ch2)7cooh或ch3(ch2)7ch＝ch(ch2)7coo-。在一個實施方案中，脂肪酸或其鹽是油酸或油酸鹽。

60、所述復(fù)合物可以使用類似于例如wo99/26979、wo2008/138348、wo2010/131237、wo2014/023976、wo2018/210759和wo2022/073982中描述的方法制備，其內(nèi)容通過引用并入本文。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，不僅可以通過在離子交換條件下，例如在離子交換柱上發(fā)現(xiàn)的條件下，使未折疊的α-乳清蛋白或其衍生物與輔因子，特別是油酸或其鹽接觸來制備復(fù)合物，而且可以在高溫下(例如50-80℃，例如50-70℃，特別是55-60℃)將α-乳清蛋白或其衍生物的溶液與輔因子一起孵育，從而產(chǎn)生適用于本發(fā)明的復(fù)合物。

61、然而，這些方法通常側(cè)重于試圖重建蛋白質(zhì)展開并與油酸離子復(fù)合的條件。此類工作側(cè)重于使用純蛋白質(zhì)，包括基礎(chǔ)蛋白的重組變體，以促進活性復(fù)合物的生產(chǎn)。然而，這種起始材料也會增加生產(chǎn)成本。

62、已知使用α-乳清蛋白從人乳以外的來源獲得的復(fù)合物，特別是使用牛α-乳清蛋白獲得的bamlet，顯示出與hamlet對細(xì)胞，特別是對腫瘤細(xì)胞在性質(zhì)上相似的作用(參見例如rammer等人(2010)mol.cancerther.9(1)24-32)。因此，如果使用hamlet或基于hamlet的組合物代替bamlet，則可以類似地觀察到下文使用bamlet證明的效果。

63、劑量

64、對個體施用的復(fù)合物的量將取決于多種因素，包括組合物的性質(zhì)以及風(fēng)險因素。然而，一般來說，當(dāng)口服施用時，每次施用使用1mg至20g/劑量的生物活性復(fù)合物，每天適當(dāng)施用。日劑量可以是例如至少或約1mg、2mg、5mg、10mg、15mg、20mg、25mg、50mg、75mg、100mg、200mg、300mg、400mg、500mg、750mg、1g、2g、3g、4g、5g、7.5g、10g、12.5g、15g或17.5g。或者，每日劑量可以小于25g、22.5g、20g、17.5g、15g、10g、7.5g、5g、4g、3g、2g、1g、750mg、500mg、400mg、300mg、200mg、100mg、75mg、50mg、25mg、20mg、15mg、10mg或5mg?；蛘?，所述復(fù)合物可以每天以每公斤體重0.1g至1g的劑量施用。其可以以每天每公斤體重至少或約0.1g、0.2g、0.3g、0.4g、0.5g、0.6g、0.7g、0.8g、0.9g或1g的劑量施用。作為替代或補充，其可以以每天每公斤體重小于1.5g、1g、0.9g、0.8g、0.7g、0.6g、0.5g、0.4g、0.3g、0.2g、0.1g的劑量施用。

65、食品和飲料組合物

66、所述復(fù)合物或藥物組合物可以是飲料的形式，特別是飲用水，或食品的形式，如嬰兒食品，或作為飲料或食品的添加劑或成分，如用于混合到飲料中的粉末，例如以蛋白質(zhì)奶昔的方式。這種食品和飲料組合物可以使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)生產(chǎn)。類似地，復(fù)合物或藥物組合物可以是用于提供胃腸外營養(yǎng)或優(yōu)選靜脈內(nèi)營養(yǎng)的組合物的形式。

67、本發(fā)明還提供了包含所定義的復(fù)合物的食品、飲料、食品添加劑或其他營養(yǎng)組合物，特別是用于治療癌癥或代謝相關(guān)病癥，如本發(fā)明的前面方面所述。

68、此類組合物的示例包括水基或乳基飲料，特別是飲用水；嬰兒食品；用于胃腸外或靜脈注射施用的營養(yǎng)組合物；食品添加劑，例如用于混合到飲料或食品中的粉末；營養(yǎng)膠囊、凝膠或片劑。

69、通用的在本說明書的說明書和權(quán)利要求書中，“包括(comprise)”和“包含(contain)”以及這些詞的變體，例如“包括(comprising)”或“包含(containing)”，意味著“包括但不限于”，并且不排除其他組件、整數(shù)或步驟。此外，除非上下文另有要求，否則單數(shù)包括復(fù)數(shù)：特別是在使用不定冠詞的情況下，除非上下文另行要求，否則說明書應(yīng)被理解為考慮復(fù)數(shù)和單數(shù)。

70、本發(fā)明每個方面的優(yōu)選特征可以是結(jié)合任何其他方面描述的。在本技術(shù)的范圍內(nèi)，明確表示在前述段落、權(quán)利要求和/或以下描述和附圖中列出的各個方面、實施方案、示例和替代方案，特別是其各個特征，可以獨立或以任何組合方式采用。也就是說，所有實施方案和/或任何實施方案的特征都可以以任何方式和/或組合進行組合，除非這些特征不兼容。