本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥，特別涉及一種九制黃精多糖及其制備方法與在制備治療腎損傷藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
1、腎臟是脊椎動(dòng)物的一種器官，屬于泌尿系統(tǒng)的一部分，負(fù)責(zé)過濾血液中的雜質(zhì)、維持體液和電解質(zhì)的平衡，最后產(chǎn)生尿液經(jīng)尿道排出體外，同時(shí)也具備內(nèi)分泌的功能以調(diào)節(jié)血壓。腎臟是維持生命活動(dòng)的重要器官，腎臟損傷是指由于腎臟小動(dòng)脈痙攣、硬化、退化、退變導(dǎo)致腎臟缺血、缺氧、腎實(shí)質(zhì)纖維化，出現(xiàn)蛋白尿，因而腎功能出現(xiàn)進(jìn)行性減退。引起腎損傷的原因主要包括外傷、腎結(jié)石、腎炎、作息不規(guī)律、不良生活習(xí)慣等等。腎損傷的可能導(dǎo)致身體水腫、尿液異常、腰部疼痛、腎功能下降、腎衰竭等危害，嚴(yán)重時(shí)可危及生病。對(duì)于人來(lái)說，腎損傷約占泌尿生殖道損傷的65％左右，其引發(fā)的水腫、疼痛、甚至是尿毒癥等嚴(yán)重影響人們的生活質(zhì)量，目前臨床上針對(duì)腎損傷還未有有效的治療手段，靶向藥物很難發(fā)揮協(xié)同增效的作用，臨床主流藥物如激素、抗生素和抗高血壓藥物，都需要長(zhǎng)期使用并且需要較高的濃度。但是高劑量及高濃度也往往會(huì)帶來(lái)嚴(yán)重的不良反應(yīng)，如非甾體抗炎藥、激素類藥物、青霉素類抗生素、acei、免疫抑制類藥物等，往往會(huì)導(dǎo)致較為嚴(yán)重的副作用，因此提高治療腎臟疾病藥物的安全性和有效性具有非常重要的意義。
2、黃精中含有豐富的多糖成分，其化學(xué)結(jié)構(gòu)復(fù)雜，不同來(lái)源、不同品種的黃精多糖含量、結(jié)構(gòu)與活性有較大的差異。目前尚未有針對(duì)九制黃精多糖單獨(dú)用于腎損傷疾病的治療的研究。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
1、鑒以此，本發(fā)明提出一種九制黃精多糖及其制備方法與在制備治療腎損傷藥物中的應(yīng)用。
2、本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實(shí)現(xiàn)的：
3、一種九制黃精多糖，命名為npcp，由果糖和葡萄糖組成，npcp為聚合度為12的直鏈菊粉型多糖，結(jié)構(gòu)為glcp-(1→和fruf-(2→末端，→1)-fruf-(2→主鏈，如式ⅰ所示；
4、
5、進(jìn)一步的，所述npcp為重均分子量2053da的中性多糖。
6、一種九制黃精多糖的制備方法，通過水提醇沉法從九制黃精中提取得到提取液，經(jīng)過d101大孔吸附樹脂脫色素處理，進(jìn)行酶解，使用sevage試劑脫除蛋白質(zhì)，得到九制黃精多糖粗品，接著經(jīng)deae-52纖維素陰離子交換層析柱和sephadex?g-25凝膠色譜柱洗脫純化，得到目標(biāo)九制黃精多糖npcp。
7、進(jìn)一步的，具體制備方法包括：
8、s1、將九制黃精干燥粉碎，九制黃精粉末加入去離子水中浸提，重復(fù)進(jìn)行2-4次，離心回收上清液，減壓濃縮，濃縮液加入無(wú)水乙醇進(jìn)行醇沉，離心收集醇沉物；
9、s2、將醇沉物充分溶解，離心去雜，減壓濃縮，過濾，采用d101大孔吸附樹脂脫色素處理濃縮液，加入木瓜蛋白酶進(jìn)行酶解，失活離心，使用sevage試劑脫除蛋白質(zhì)，過濾，透析，冷凍干燥得到九制黃精多糖粗品，標(biāo)記為npcps；
10、s3、取npcps溶解液，上樣至deae-52纖維素陰離子交換層析柱，用去離子水、0.05mnacl和0.1m?nacl溶液以1ml/min洗脫，初步得到去離子水洗脫的中性多糖npcps粗品；
11、s4、采用sephadex?g-25凝膠色譜柱進(jìn)行純化，采用去離子水以0.5ml/min洗脫，冷凍干燥，得到均一九制黃精多糖npcp。
12、進(jìn)一步的，步驟s1中，所述九制黃精粉末與去離子水的料液比為1:10-20g/ml；所述浸提的溫度為90-100℃，時(shí)間為2-4h；所述無(wú)水乙醇與濃縮液的體積比為3-5:1；所述醇沉是在0-4℃的條件下處理12-24h。
13、進(jìn)一步的，步驟s2中，所述木瓜蛋白酶的加入量為濃縮液的2wt％-4wt％，酶活力為8×105u/g。所述酶解的溫度50-55℃，時(shí)間1-3h；所述透析是在0-4℃下使用截留分子量1kda的透析袋透析48-72h。
14、一種九制黃精多糖在制備治療腎損傷藥物中的應(yīng)用。
15、進(jìn)一步的，腎損傷藥物包含所述九制黃精多糖和藥學(xué)上可接受的輔料。
16、進(jìn)一步的，所述腎損傷藥物中含有200-400mg/kg的均一九制黃精多糖npcp。
17、進(jìn)一步的，所述九制黃精多糖是通過以下途徑來(lái)改善腎損傷；
18、(1)改善腎功能標(biāo)志物含量，降低血肌酐、血尿素氮和尿酸含量；
19、(2)改善氧化應(yīng)激損傷，降低體內(nèi)活性氧含量和丙二醛含量，提高sod超氧化物歧化酶含量和過氧化氫酶含量；
20、(3)降低tnf-α、il-1β和il-6促炎細(xì)胞因子的表達(dá)；
21、(4)改善腸道菌群紊亂，增加rikenella，parasutterella菌屬豐度，降低asf356、blautia菌屬豐度；
22、(5)上調(diào)腸道內(nèi)的短鏈脂肪酸，增加乙酸、丙酸、異丁酸和丁酸含量。
23、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：
24、本發(fā)明得到的均一九制黃精多糖npcp通過改善腎功能標(biāo)志物含量，改善氧化應(yīng)激損傷，降低促炎細(xì)胞因子的表達(dá)，改善腸道菌群紊亂和上調(diào)腸道內(nèi)的短鏈脂肪酸來(lái)實(shí)現(xiàn)對(duì)腺嘌呤誘導(dǎo)hk-2細(xì)胞損傷的保護(hù)作用，為九制黃精多糖有效改善腺嘌呤誘導(dǎo)的腎毒性提供了更多的治療方向，本發(fā)明為臨床尋找有效制備治療腎損傷藥物提供理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
1.一種九制黃精多糖，其特征在于，命名為npcp，由摩爾比1:11的果糖和葡萄糖組成，npcp為聚合度為12的直鏈菊粉型多糖，結(jié)構(gòu)為glcp-(1→和fruf-(2→末端，→1)-fruf-(2→主鏈，如式ⅰ所示；
2.如權(quán)利要求1所述的一種九制黃精多糖，其特征在于，所述npcp為重均分子量2053da的中性多糖。
3.如權(quán)利要求1所述的一種九制黃精多糖的制備方法，其特征在于，通過水提醇沉法從九制黃精中提取得到提取液，經(jīng)過d101大孔吸附樹脂脫色素處理，進(jìn)行酶解，使用sevage試劑脫除蛋白質(zhì)，得到九制黃精多糖粗品，接著經(jīng)deae-52纖維素陰離子交換層析柱和sephadex?g-25凝膠色譜柱洗脫純化，得到目標(biāo)九制黃精多糖npcp。
4.如權(quán)利要求3所述的一種九制黃精多糖的制備方法，其特征在于，具體制備方法包括：
5.如權(quán)利要求4所述的一種九制黃精多糖的制備方法，其特征在于，步驟s1中，所述九制黃精粉末與去離子水的料液比為1:10-20g/ml；所述浸提的溫度為90-100℃，時(shí)間為2-4h；所述無(wú)水乙醇與濃縮液的體積比為3-5:1；所述醇沉是在0-4℃的條件下處理12-24h。
6.如權(quán)利要求4所述的一種九制黃精多糖的制備方法，其特征在于，步驟s2中，所述木瓜蛋白酶的加入量為濃縮液的2wt％-4wt％，酶活力為8×105u/g。所述酶解的溫度50-55℃，時(shí)間1-3h；所述透析是在0-4℃下使用截留分子量1kda的透析袋透析48-72h。
7.權(quán)利要求1所述的一種九制黃精多糖在制備治療腎損傷藥物中的應(yīng)用。
8.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，腎損傷藥物包含所述九制黃精多糖和藥學(xué)上可接受的輔料。
9.如權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于，所述腎損傷藥物中含有200-400mg/kg的均一九制黃精多糖npcp。
10.如權(quán)利要求7所述的應(yīng)用，其特征在于，所述九制黃精多糖是通過以下途徑來(lái)改善腎損傷；