本發(fā)明涉及微生物應(yīng)用領(lǐng)域，尤其是涉及一株鞭毛單胞菌flagellimonassp.sn16的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

1、球形棕囊藻(phaeocystisglobosa)是引起有害藻華的常見物種，具有復(fù)雜的異型生活史，表現(xiàn)為不同形態(tài)的游離單細(xì)胞和囊體的交替轉(zhuǎn)變。球形棕囊藻赤潮爆發(fā)則主要以囊體形式出現(xiàn)，囊體由多糖組成的透明膠質(zhì)層包裹，多個直徑為3～9μm的細(xì)胞均勻地附著在膠質(zhì)層周圍，中央腔室充滿海水，為中空的球狀結(jié)構(gòu)，大小約為0.25～3cm，其堅韌的凝膠狀基質(zhì)和增大的生物體積能為細(xì)胞提供物理防護，減少細(xì)菌、捕食者等的侵害。研究表明，橈足類動物共存情況下，囊體的數(shù)量與大小明顯增加以減小被捕食風(fēng)險。此外，囊體還是球形棕囊藻實現(xiàn)快速繁殖的高效生長策略，研究發(fā)現(xiàn)在相同的環(huán)境條件下培養(yǎng)，囊體內(nèi)細(xì)胞具有比游離單細(xì)胞更高的生長速率。囊體形成賦予球形棕囊藻優(yōu)越的競爭優(yōu)勢，能在短時間增殖大量藻細(xì)胞，導(dǎo)致大規(guī)模藻華的發(fā)生。球形棕囊藻赤潮在全球許多近海海域均有記錄，對當(dāng)?shù)厣a(chǎn)生活、水產(chǎn)養(yǎng)殖和海洋生態(tài)環(huán)境造成嚴(yán)重影響，其膠質(zhì)囊膜會堵塞核電站冷水源取水口，威脅核電安全，因此治理其囊體赤潮十分重要。

2、目前，關(guān)于赤潮治理的方法主要分為物理、化學(xué)和生物法。相較于物理法和化學(xué)法存在人工成本高、二次污染的問題，生物法由于成本低廉且對環(huán)境友好受到廣泛關(guān)注。生物法包括使用水生植物、水生動物以及殺藻微生物來抑制藻類生長或殺害藻類。源自植物的化感物質(zhì)5,4'-dhf(5,4'-二羥基黃酮)處理球形棕囊藻3天后，可誘導(dǎo)球形棕囊藻發(fā)生涉及活性氧(ros)以及線粒體途徑的程序性死亡。褶皺臂尾輪蟲(brachionus?plicatilis)在鹽度5％～45％的環(huán)境中均能對球形棕囊藻發(fā)揮清除作用。目前已報道針對于球形棕囊藻的殺藻微生物有厚壁菌門的芽孢桿菌屬bacillus?sp.(guan?c,et?al.photoinhibition?ofphaeocystis?globos?a?resulting?from?oxidative?stress?induced?by?a?marinealgicidal?bacterium?bacillus?sp.lp-10[j].scientific?reports,2015,5:17002)，放線菌門的鏈霉菌屬streptomyces?sp.(cai?g,et?al.lysing?bloom-causing?algaphaeocystis?globosa?with?microbial?algicide:an?efficient?proc?ess?thatdecreases?the?toxicity?of?algal?exudates[j].scientific?reports,2016,6:20081)和微桿菌屬microbacterium?sp.(王靈,向文洲,衛(wèi)華寧.一株微桿菌cba01對球形棕囊藻的溶藻特性與生理響應(yīng)研究[j].生物技術(shù)通報,2021,37(10):91-99)，γ-變形菌門的霍氏菌屬hahe?lla?sp.(zhang?h,et?al.toxic?effects?of?prodigiosin?secreted?by?hahellasp.ka22?on?harmf?ul?alga?phaeocystis?globosa[j].frontiers?in?microbiology,2017,8:999)和微泡菌屬microb?ulbifer?sp.(zhu?x,et?al.a?novel?algicidalbacterium,microbulbifer?sp.yx04,triggered?oxi?dative?damage?and?autophagiccell?death?in?phaeocystis?globosa,which?causes?harmful?algal?blooms[j].microbiology?spectrum,2022,10(1):e0093421)，通過胞外分泌殺藻化合物間接作用于球形棕囊藻以達(dá)到殺藻目的，其中5％的bacillus?sp.lp-10菌上清液處理球形棕囊藻72h后的殺藻率為82.2％(guan?c,et?al.photoinhibition?of?phaeocystis?globosaresulting?f?rom?oxidative?stress?induced?by?a?marine?algicidal?bacteriumbacillus?sp.lp-10[j].scientifi?c?reports,2015,5:17002)；10％的streptomycesalboflavus?rps處理48h可達(dá)到95％的殺藻率(dam?h?g,et?al.streptomyces?alboflavusrps?and?its?novel?and?high?algicidal?activi?ty?against?harmful?algal?bloomspecies?phaeocystis?globosa[j].plos?one,2014,9(3):e92907)；用hahella?sp.ka22產(chǎn)生的靈菌紅素(5μg/ml)在72h內(nèi)具有84％的滅藻活性(z?hang?h,et?al.toxic?effects?ofprodigiosin?secreted?by?hahella?sp.ka22?on?harmful?alga?phaeocystis?globosa[j].frontiers?in?microbiology,2017,8:999)；培養(yǎng)72h的microbulbife?r?sp.cba01與球形棕囊藻共培養(yǎng)6d后溶藻效果最好，為80.24％±5.43％(王靈,向文洲,衛(wèi)華寧.一株微桿菌cba01對球形棕囊藻的溶藻特性與生理響應(yīng)研究[j].生物技術(shù)通報,2021,37(10):91-99)；添加5％microbulbifer?maritimus?yx04培養(yǎng)液處理24h可導(dǎo)致85％的藻細(xì)胞死亡(zhu?x,et?al.a?novel?algicidal?bacterium,microbulbifer?sp.yx04,triggered?oxidative?damage?and?autophagic?cell?death?in?phaeocystis?globosa,which?causesharmful?algal?blooms[j].microbiology?spectrum,2022,10(1):e0093421)。上述所有關(guān)于生物治理球形棕囊藻藻華的方法都是針對游離單細(xì)胞開展試驗，而對囊體的的研究則未見報道。但是在自然海域中，球形棕囊藻藻華都是以囊體形式爆發(fā)。目前關(guān)于球形棕囊藻囊體藻華的治理研究，只有曹西華等人(曹西華,俞志明,邱麗霞.改性黏土法消除球形棕囊藻赤潮的現(xiàn)場實驗與效果評估[j].海洋與湖泊,2017,48(4):753-759)采用少量多次噴灑改性黏土的方式在爆發(fā)球形棕囊藻赤潮的廣西防城港海域進行海上圍隔實驗，發(fā)現(xiàn)水體中的球形棕囊藻囊體能被快速消除。但是該方法導(dǎo)致大量黏土沉降淤積，易堵塞航道，同時對海洋環(huán)境會造成一定的負(fù)面影響。

3、綜上所述，當(dāng)前對于球形棕囊藻囊體赤潮的治理方法缺乏，現(xiàn)有關(guān)于微生物殺藻的研究也集中在對游離單細(xì)胞上，而對形成赤潮的膠質(zhì)囊體的研究卻未見報道。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是為克服上述現(xiàn)有微生物治理球形棕囊藻囊體藻華的不足，提供一種對球形棕囊藻單細(xì)胞和囊體均具有殺藻作用的鞭毛單胞菌及其應(yīng)用，以有效治理球形棕囊藻藻華，保護海洋生態(tài)環(huán)境。

2、一種對球形棕囊藻游離單細(xì)胞和囊體具備良好殺藻效果的鞭毛單胞菌flagellimonas?sp.sn16，其保藏于廣東省微生物菌種保藏中心，保藏時間為2025年01月10日，保藏地址為廣州市先烈中路100號大院59號樓5樓，保藏編號為gdmcc?no.65745。該菌株對球形棕囊藻的游離單細(xì)胞和囊體均具有殺藻活性。

3、鞭毛單胞菌flagellimonas?sp.sn16在球形棕囊藻囊體赤潮治理中的應(yīng)用。

4、一種殺藻劑，其有效成分為上述鞭毛單胞菌培養(yǎng)液的上清。

5、優(yōu)選的，所述殺藻劑適用的藻類所屬類別包括甲藻門、硅藻門、定鞭藻門等。

6、更優(yōu)選的，所述殺藻劑適用的具體藻類種類包括東海原甲藻、強壯前溝藻、塔瑪亞歷山大藻、鏈狀亞歷山大藻、錐狀斯克里普藻、威氏海鏈藻、中肋骨條藻、球形棕囊藻等。

7、進一步的，所述殺藻劑可在治理球形棕囊藻藻華中的應(yīng)用。

8、從海洋環(huán)境中成功分離獲得殺藻菌-鞭毛單胞菌flagellimonas?sp.sn16，從zobell?2216e固體培養(yǎng)平板上挑取單菌落在zobell?2216e液體培養(yǎng)基中活化培養(yǎng)至平臺期，培養(yǎng)液離心后取上清液用0.22μm的滅菌膜過濾得到無菌的sn16培養(yǎng)上清液，該上清液對球形棕囊藻游離單細(xì)胞和囊體均具有顯著的殺藻效果，處理12h即可導(dǎo)致藻細(xì)胞裂解。在球形棕囊藻赤潮現(xiàn)場開展實驗也表現(xiàn)出對囊體良好的殺藻效果，處理后的水體未見明顯的生物毒性。此外，該上清的殺藻活性可以在-20～100℃，ph?2～12的環(huán)境下保持穩(wěn)定。

9、與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果在于：

10、本發(fā)明實現(xiàn)單一菌株對球形棕囊藻單細(xì)胞及囊體的同步高效裂解；本發(fā)明提供的菌株sn16上清能夠高效地殺死實驗室和自然環(huán)境中不同狀態(tài)的球形棕囊藻，內(nèi)含的殺藻物質(zhì)具備良好的溫度穩(wěn)定性和酸堿耐受性，適用于復(fù)雜海洋環(huán)境，同時對明亮發(fā)光桿菌和鹵蟲沒有明顯的急性毒性，說明flagellimonas?sp.sn16在球形棕囊藻藻華生物治理領(lǐng)域具有重要的應(yīng)用價值，其殺藻穩(wěn)定性和生態(tài)安全性顯示其作為殺藻制劑開發(fā)的巨大潛力，有望在實際球形棕囊藻囊體藻華的治理中發(fā)揮顯著成效。實驗表明，本發(fā)明菌株sn16對東海原甲藻、強壯前溝藻、塔瑪亞歷山大、錐狀斯克里普藻、鏈狀亞歷山大藻、威氏海鏈藻、中肋骨條藻、球形棕囊藻等甲藻門、硅藻門、定鞭藻門的多種藻具有殺藻效果，說明sn16的殺藻作用具有廣譜性，對多種藻均具有明顯的殺藻活性。